【摘 要】
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我国是葡萄生产大国,葡萄产量位居世界第五位。近年来,由葡萄卷叶相关病毒(Grapevine Leafroll Associated Virus,GLRaV)引起的葡萄卷叶病危害严重,一般造成减产20%-40%。目
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我国是葡萄生产大国,葡萄产量位居世界第五位。近年来,由葡萄卷叶相关病毒(Grapevine Leafroll Associated Virus,GLRaV)引起的葡萄卷叶病危害严重,一般造成减产20%-40%。目前已经发现有9种GLRaVs可以引起该病害,其中最常见的是GLRaV-1,2和3。GLRaV-3在我国已经有相关报导,但是GLRaV-2还未见报导。本研究针对我国的葡萄品种进行GLRaV-2的血清学检测,证实我国存在GLRaV-2并对GLRaV-2的CP基因进行了克隆和序列分析,最后对GLRaV-2的外壳蛋白进行了诱导表达。 本研究采用双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)对17个葡萄品种进行了检测,结果表明塞米隆、罗查里奥、品丽珠、京秀、马格拉契带有GLRaV-2。从葡萄品种“品丽株”中提取病毒的dsRNA,根据Zhu报道的引物序列合成引物并对GLRaV-2-sh的CP基因进行RT-PCR扩增出了673bp特异性片段,将RT-PCR产物插入克隆载体pMD18-T中得到5个克隆子,选取克隆子GLRaV-2-sh-CP进行测序并将测序结果在GenBank上登陆,序列号为AY842932。将测序结果与现已报导的序列进行比较分析表明:GLRaV-2-sh-CP与GLRaV-2-pn-CP和GLRaV-2-se-CP核苷酸同源性均为98%,氨基酸同源性为99%,与GLRaV-2-H4-CP氨基酸同源性为94%。 将所克隆的GLRaV-2的CP基因插入原核表达载体PET-22b(+)并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE分析表明GLRaV-2的CP基因在原核表达载体PET-22b(+)中得到了成功表达,表达的目标蛋白的分子量为22KDa。将原核表达产物与GLRaV-2的碱性磷酸脂酶标抗体AG-IgG进行Western blot分析表明原核表达的目标蛋白与GLRaV-2的抗体发生了血清学反应。
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