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目的:脑创伤是一严重的临床疾患,往往伴随着复杂的病生理反应,反复多变的临床症状,成为目前神经外科领域的诊断、治疗、判断预后的难点之一。近期的研究表明,原发性脑创伤可引发一系列分子、细胞的级联反应,产生基因、蛋白质表达变化,导致神经细胞损伤或死亡。 为了进一步研究脑创伤后病生理变化的机制,我们在本次研究中的目的就是应用蛋白质组学技术(主要包括双向电泳技术、生物质谱分析),分析神经组织或细胞中的蛋白质组在脑创伤后表达的变化,进一步阐明脑创伤后的病生理演变机制。通过研究,试图发现可以用于提示病情变化、判断预后的生物标记物,指导治疗的靶标。 人脑创伤后蛋白质组表达变化研究的前提,就是首先构建完整的、高质量的、良好重复性的人脑皮层蛋白质组的双向电泳表达谱图。因此,在第一部分中,我们的目的是建立适用于分离人脑组织皮层总蛋白的双向电泳的技术体系。在此基础上,第二部分的研究目的是在重度脑创伤后急性期内,发现人脑创伤皮层中的产生差异表达的蛋白质组。由于致伤程度的不同,可导致临床症状和预后的不同。在第三部分中,对于不同程度的原发性脑创伤,所导致的差异蛋白质组表达情况,进行研究。 方法:在第一部分中,手术中获取的19例受伤人脑皮层组织标本,通过应用适合神经组织裂解液提取总蛋白,采用双向电泳(等电聚焦、SDS-PAGE)分离蛋白,通过考马斯亮蓝R-350、硝酸银对于2D胶进行染色,构建高重复性人脑蛋白双向电泳的图谱。 在第二部分中,选取在脑创伤急性期内,伤后不同时间的人脑皮层进行差异蛋白质组研究。所有脑创伤标本均来自重型颅脑创伤后的病人,急症GCS评分小于8。以切除左额叶的挫伤皮层脑组织作为本次研究的标本。在本次研究中,总共选取11例成年人的创伤标本,其中男性9例;女性2例,年龄