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阿米卡星为第三代氨基糖苷类抗生素,其抗菌谱广,对大多数氨基糖苷类钝化酶稳定,可用于治疗革兰阴性杆菌引起的感染。其主要不良反应为耳毒性和肾毒性。本研究参考国际药典(IP)和7.5版欧洲药典(EP),在此基础上建立了HPLC-UV末端吸收法和HPLC-脉冲安培电化学检测器法(PED)分别测定阿米卡星的含量和有关物质,并对市售的35家生产企业的硫酸阿米卡星注射液的含量和有关物质进行评价。同时针对2010版中国药典(Chp)中硫酸阿米卡星注射液的p H值限度过于宽泛,大多数生产企业灭菌条件存在安全隐患等问题展开研究,对市售194批硫酸阿米卡星注射液的p H、AE值、渗透压进行测定。第一部分HPLC-紫外末端吸收法测定硫酸阿米卡星含量目的:建立灵敏、高效的HPLC-UV末端吸收法测定阿米卡星含量,对各硫酸阿米卡星注射液生产企业间投料情况进行评价。方法:采用HPLC-UV末端吸收法对35家生产企业的硫酸阿米卡星注射液进行含量测定,色谱分离采用Phenomenex-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相:硫酸钠水溶液(用p H为3的0.2mol/L磷酸二氢钾缓冲液50m L溶解1.8g辛烷磺酸钠、20g无水硫酸钠,再加水稀释至1000ml)(A)-乙腈(B)(92:8);检测波长:200nm;流速:1.0m L/min;进样体积为10μL。结果:阿米卡星的峰面积和浓度在测定浓度范围内具有良好的线性关系,精密度、稳定性、检测限和定量限均符合要求。加样回收率为100.7%,精密度RSD为0.3%。对35家硫酸阿米卡星注射液进行测定,结果表明194批次样品含量为91.7%~107.7%,均符合标准规定,表明各企业基本按100%投料。对8家企业样品的含量进行单因素方差分析,不同企业之间存在显著差异(P<0.05)。结论:本法简便、快速、灵敏度高,可用于阿米卡星含量的测定,硫酸阿米卡星注射液检测结果表明各企业间投料水平存在差异,同时提示应当加强企业内产品的均一性控制。第二部分HPLC-PED测定硫酸阿米卡星有关物质的研究目的:建立HPLC-PED测定硫酸阿米卡星注射液的有关物质,对硫酸阿米卡星有关物质的来源和归属进行分析。方法:采用HPLC-PED对25个生产厂家的硫酸阿米卡星注射液和3个原料生产厂家的硫酸阿米卡星原料的有关物质进行测定。色谱分离采用Boston Green ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:20g/L硫酸钠溶液[含1.8g/L辛烷磺酸钠,1.4%(v/v)四氢呋喃,5%(v/v)0.2mol/L磷酸二氢钾(p H 3.0)](A)-28g/L硫酸钠溶液[含1.8g/L辛烷磺酸钠,1.4%v/v四氢呋喃,5%v/v 0.2mol/L磷酸二氢钾(p H 3.0)](B),梯度洗脱。脉冲安培电化学检测器的检测电位为:E1=0.10V、E2=-2.00V和E3=0.60 V,E4=-0.10 V,t1、t2、t3和t4分别是0-0.40s、0.41-0.42 s、0.43 s和0.44-0.50 s,积分区间在0.20-0.40s。柱后加入0.5mol/L氢氧化钠,流速为0.3m L/min。结果:结果表明各杂质峰之间、各杂质峰与阿米卡星主峰间的分离度均符合规定。对3个厂家的原料和25家硫酸阿米卡星注射液进行测定,结果在国产硫酸阿米卡星原料中检出9个杂质,注射液中检出10个杂质。在高温和氧化条件下,杂质数量增加同时杂质D增大,说明杂质D即既是起始原料也是降解产物。结论:本法灵敏度高、专属性好,可用于阿米卡星有关物质的测定,为更好的分析国内硫酸阿米卡星注射液总体情况提供技术依据,并且实现了对杂质H的检测,使之成为质量评价的重要指标,同时考察原料质量,从而使制剂中的主要杂质与原料中的杂质建立了对应关系。第三部分不同硫酸阿米卡星注射液生产厂家处方工艺的评价及条件优化目的:摸索建立硫酸阿米卡星注射液合理的p H值范围,掌握其p H值对抗菌活性的影响,通过渗透压对辅料添加进行评价,同时选择合理的灭菌条件,保证无菌水平。方法:1采用冰点测定法测定194批硫酸阿米卡星注射液的渗透压。2对194批阿米卡星注射液的p H值进行测定,将硫酸阿米卡星注射液按不同p H范围分成三组(4.2~5.0,5.1~5.8,5.9~6.5),测定其AE值,同时比较三组中原料来源于同一厂家且灭菌条件相同样品的杂质总量。3将3家原料生产企业的原料分别制成不同p H值范围的水溶液,对其效价进行测定,评价不同p H值阿米卡星水溶液的抗菌活性。4考察3个处方在100℃15min、100℃30min、115℃30min、121℃15min 4种灭菌条件前后颜色、p H值、有关物质及含量变化,评价本品对灭菌条件的耐受情况。结果:1 194批样品渗透压测定结果显示,其中125批样品渗透压小于285m Osmol/kg,33批样品渗透压介于285m Osmol/kg和310m Osmol/kg之间,36批样品渗透压大于310m Osmol/kg。2 194批次注射液p H值在4.2~6.5之间,3组p H比较结果显示,p H值范围在4.2~5.0样品AE值最低,杂质总量最低。3 3组阿米卡星水溶液效价检测结果,p H值3.9~5.0范围样品抗菌活性最强,其次为3.0~3.5,最差为6.0~6.5。4 3种处方样品在4种条件下灭菌后样品性状和p H值未见明显变化,有关物质和含量虽有所变化,但仍可以达到标准规定。结论:1 64%的样品低于正常人体渗透压。低渗会造成溶血,渗透压测定结果提示个别企业处方比例存在不科学的现象。2本品水溶液p H值考察结果说明现行标准p H值限度范围4.0~7.0过于宽泛。进而确定了USP35和BP2012规定p H值限度为“3.5~5.5”的合理性,从而为标准修订和质量控制提供了依据。3灭菌条件考察结果显示,为了保证无菌水平,建议企业采用湿热灭菌121℃15min的灭菌条件。