碘化N-正丁基氟哌啶醇（N-n-butyl haloperidol iodide，F2）是我课题组研究合成的一种新型化合物。我们以往的研究表明，F2有抗心肌缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）损伤、心肌细胞以及心脏微血管内皮细胞（以下简称内皮细胞）缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）损伤的作用，其主要机制包括阻断细胞膜钙通道、抑制早期生长反应基因-1（early growth response gene-1，Egr-1）过表达以及减轻氧化应激水平。此外，我们研究还发现，用F2处理正常内皮细胞，F2可时效依赖地增加肝激酶B1（liver kinase B1，LKB1）、单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）的磷酸化，在180 min时达到最高水平，表明F2对AMPK有激活作用。据文献报道，激活AMPK可拮抗心肌I/R损伤。又有研究表明，激活AMPK可减少活性氧（ROS）的产生。因此，本研究以AMPK为切入点，借助于内皮细胞H/R模型，首先观察了H/R内皮细胞中AMPK活性的变化，借助信号通路上特异性抑制剂研究AMPK信号通路在H/R内皮细胞中的生物学功能，进一步探讨和明确F2保护内皮细胞H/R损伤的AMPK相关通路机制。　　方法：　　1.酶消化法分离新生SD大鼠心脏微血管内皮细胞并采用免疫细胞化学法进行鉴定。　　2.培养的内皮细胞换用被高纯氮气饱和的缺氧液，置于密闭且充满氮气的缺氧盒中，37℃缺氧4 h，后又在正常培养条件下培养6 h，造成H/R损伤。　　3. Western blot检测内皮细胞磷酸化LKB1（P-LKB1）、LKB1、P-AMPK、AMPK蛋白表达的变化。　　4.荧光显微镜检测ROS，以反映内皮细胞氧化应激水平。　　5. MTT法检测内皮细胞存活率、比色法测定培养细胞上清中乳酸脱氢酶（LDH）的漏出，以反映内皮细胞损伤程度；Annexin V-FITC/PI双染法检测早期凋亡、TUNEL法检测晚期凋亡、比色法检测Caspase-3活性，以反映内皮细胞凋亡程度。　　结果：　　1.经差速贴壁纯化后的细胞用免疫细胞化学鉴定，CD31以及vWF阳性细胞达95％以上。　　2. F2能减轻H/R诱导的内皮细胞损伤，使凋亡程度减轻，LDH漏出减少，Caspase-3活性降低，细胞存活率升高。　　3.正常情况下，内皮细胞以10μM的F2分别刺激0，30，60，120，180，240 min，F2可时效依赖地增加LKB1、AMPK的磷酸化并在180 min时达到最高水平。固定刺激时间为180 min，F2可量效依赖地增加LKB1、AMPK的磷酸化。此外，H/R可增加内皮细胞LKB1、AMPK的磷酸化，而F2可量效依赖地增加H/R内皮细胞LKB1、AMPK的磷酸化水平。　　4. AMPK特异性抑制剂Compound C可拮抗F2对内皮细胞H/R损伤的改善作用，使内皮细胞存活率降低，LDH漏出增加，凋亡程度加重。　　5. F2可降低H/R内皮细胞中ROS含量，而Compound C可消除F2对ROS水平的改善作用，使内皮细胞中ROS含量增加。　　6. ROS清除剂NAC可减轻H/R损伤，使内皮细胞存活率升高，LDH漏出减少和细胞凋亡减轻。　　结论：　　1. AMPK是一种重要的内皮细胞H/R损伤保护因子，其活性增加可减轻损伤，活性降低可加重损伤。　　2.激活AMPK可使H/R内皮细胞中ROS水平降低。　　3. F2可激活H/R内皮细胞LKB1/AMPK信号通路，减少ROS生成，进而减轻H/R损伤，这可能是其抗心肌I/R损伤的一个重要机制。