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【背景和目的】再生基因（regenerating gene,Reg）蛋白是一种胰腺炎时自胰液中提纯的炎症蛋白,再生基因蛋白家族属钙依赖的植物血凝素超家族。它代表一组分泌蛋白,其功能相当于急性反应蛋白,抗凋亡因子或胰腺β细胞和神经细胞的生长因子。Reg蛋白家族的作用最早是在糖尿病研究中发现的,近年来随着研究的深入,Reg蛋白在神经系统损伤中的重要作用逐渐被人们所注意。Reg蛋白家族分为四个亚类:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ。其中RegⅢ中的Reg-2蛋白是一种应激蛋白,既往在消化系统中疾病的研究中显示可能具有抗细胞凋亡、促进有丝分裂、抗炎和保护组织的功能。Reg-2在正常的成年大鼠中枢和外周神经系统不表达,但在中枢神经系统发育过程和外周神经系统损伤、疾病等条件下,Reg蛋白的表达上调。目前Reg-2蛋白的研究仅集中在中枢神经系统的发育和外周神经的损伤,而关于中枢神经损伤后Reg-2蛋白的表达还未见报道,因此调查Reg-2蛋白在中枢神经系统损伤后的分布情况和表达量及其与神经因子之间的关系,可以进一步的研究Reg-2蛋白在中枢神经再生中的作用。本研究采用免疫荧光染色、免疫荧光双标和Western blotting半定量方法,使用特异性Reg-2、胶质纤维酸性蛋白（Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP）,少突胶质细胞系转录因子2（Oligodendrocyte lineage transcription factor 2,Olig2）以及神经肽Y（Neuropeptide Y,NPY）,降钙素基因相关肽（Calcitonin gene related peptide,CGRP）,神经性生长蛋白-43（Growth associated protein-43,GAP-43）抗体,观察Reg-2蛋白在中枢神经系统损伤后的表达变化和其他神经因子的关系,推测在神经再生过程中Reg-2蛋白的作用。【材料与方法】1.实验动物及脊髓损伤模型的建立SD雌性大鼠45只,体重250-300g。大鼠麻醉后无菌操作下打开椎板,在T9至T10脊髓节段之间用手术刀完全切断脊髓,建立大鼠脊髓横断损伤（spinal cord injury,SCI）模型。术后1h、1d、3d、7d和14d分别取出损伤区脊髓,经横断切面进行连续冰冻切片。2.脊髓损伤后免疫荧光染色和免疫荧光双标染色将冰冻切片分别加入小鼠抗Reg-2抗体和FITC标记的羊抗小鼠IgG,荧光显微镜下观察计数。将冰冻切片加入小鼠抗Reg-2抗体后,再分别加入GFAP、Olig2、NPY、CGRP及GAP-43抗体,然后再加入FITC标记的羊抗小鼠和TRITC标记的羊抗兔IgG,荧光显微镜下观察。3.免疫印迹法检测取术后1h、1d、3d、7d和14d的损伤区脊髓组织提取蛋白,行聚丙酰胺凝胶电泳,转移到PVDF膜上并加抗体作用,DAB显色观察。【结果】1.脊髓损伤后免疫荧光染色结果正常脊髓中没有Reg-2的表达。脊髓损伤组中表达Reg-2的阳性细胞随着时间的推移,先增加后减少,脊髓损伤后的1周内维持在较高水平,其中第3d后角神经元的Reg-2表达最高,第7d前角神经元Reg-2的表达最高,14d表达水平最低,但仍有表达。2.脊髓损伤后免疫荧光双标染色结果脊髓损伤后Reg-2可与CGRP、NPY及GAP-43出现共同表达;Olig2在Reg-2阳性细胞周围的髓鞘有明显的表达;Reg-2与GFAP不存在明显的共同表达。3.免疫印迹结果免疫印迹结果显示,Reg-2在正常脊髓中不表达,脊髓损伤后短期内Reg-2的表达水平开始升高,在第3d达到高峰,之后开始下降,到第14d最低,脊髓损伤后Reg-2能够维持两周的表达。【结论】1.脊髓损伤的早期Reg-2在小细胞神经元中表达,随着时间的延长逐渐在大细胞神经元中表达,并且表达的先后次序呈现出一定的规律性,即先后角后前角,先感觉神经元后运动神经元。2.脊髓损伤后Reg-2与CGRP,NPY及GAP-43出现共同表达;Olig2在Reg-2阳性细胞周围的髓鞘有明显的表达;Reg-2与GFAP不存在明显的共同表达。