荧光定量PCR检测白血病WT1基因表达及其临床意义

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目的 建立荧光定量RT-PCR检测WT1基因的方法,探讨WT1基因在各类白血病的表达及在微小残留病检测中的意义。 方法 RT-PCR分别扩增K562细胞WT1基因及β-actin基因,凝胶切割并回收、纯化,经紫外分光光度计定量后作为标准模板。采用荧光定量RT-PCR方法检测80例白血病患者骨髓或外周血及10例正常人外周血的WT1基因表达,长期跟踪15例急性白血病患者外周血WT1基因表达。实验数据用spss软件进行统计学分析。 结果 10例初发急性白血病患者骨髓和外周WT1基因表达无显著差异。白血病患者组(49例AML、18例ALL、7例HAL、6例CML)与正常人 山西医科大学硕士学位论文2003外周血WTI基因表达有显著差异,髓系表达高于淋巴系,MS显著低表达。WTI基因表达与性别、发病时白细胞数、染色体核型无明显相关性。高水平wTI表达的患者CR率低、长期生存期短、预后差。对巧例急性白血病患者外周血WTI基因表达长期跟踪检测,4例己达完全缓解的患者3一7。个月后复发,2例在临床复发前1一2月,WTI水平明显增高,至少上升1个对数级别。3例对诱导化疗耐药的患者WTI水平始终无明显变化。 结论荧光定量RT-PCR方法检测WTI基因灵敏性高、特异性好。与正常人外周血比较,wTI在所有类型的白血病中呈高度表达,表达水平与疾病的状况相关。运用荧光定量RJ’- PCR方法对急性白血病患者外周血WTI基因表达定量分析,可以为微小残留病的监测提供有用工具。
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