【摘 要】
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目的:嵌合抗原受体（CARs）修饰可显著增强免疫效应细胞的抗肿瘤活性,本课题利用前期工作中获得的人血管内皮生长因子VEGF165高度特异性亲和恶性肿瘤组织中高表达的插入结构域受体（KDR）的特点,以VEGF165为靶分子,铰链区与跨膜区CD8α,共刺激分子CD28、胞内信号段CD3ζ融合构建二代CAR,病毒转导Jurkat细胞挑选永久表达KDR-CAR的Jurkat细胞株。通过肺癌细胞模型评价KD
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目的:嵌合抗原受体（CARs）修饰可显著增强免疫效应细胞的抗肿瘤活性,本课题利用前期工作中获得的人血管内皮生长因子VEGF165高度特异性亲和恶性肿瘤组织中高表达的插入结构域受体（KDR）的特点,以VEGF165为靶分子,铰链区与跨膜区CD8α,共刺激分子CD28、胞内信号段CD3ζ融合构建二代CAR,病毒转导Jurkat细胞挑选永久表达KDR-CAR的Jurkat细胞株。通过肺癌细胞模型评价KDR-CAR-Jurkat细胞对KDR的识别和肿瘤细胞杀伤活性;验证KDR-CAR-T细胞靶向过表达KDR肺癌细胞A549KDR的杀伤活性;构建Balb/c-nu小鼠肺癌细胞皮下移植瘤模型,体内抗肿瘤试验评价KDR-CAR-T细胞的体内抗肿瘤作用。方法:全基因人工合成CD8α-CD28-CD3ζ并与特异性识别KDR的VEGF165组合构建二代CAR分子,克隆入慢病毒载体;包装含有目的基因VEGF165的慢病毒,感染Jurkat,获得目的细胞KDR-CAR-Jurkat细胞;经抗生素Puromycin培养后获得稳定遗传的Jurkat细胞;运用流式仪、Western blot以及RT-PCR检测筛选后KDR-CAR-Jurkat细胞中VEGF165的整合与表达;细胞功能表型试验评估目的细胞株对过表达肺癌细胞A549KDR的杀伤能力;利用志愿者外周血PBMC细胞分离纯化人外周血T淋巴细胞,慢病毒转染构建KDR-CAR-T细胞;检测KDR-CAR-T细胞对过表达KDR肺癌细胞A549KDR的杀伤;构建BALB/c-nu小鼠肺癌模型,验证KDR-CAR-T细胞对过表达肺癌细胞A549KDR裸鼠移植瘤抑制作用。结果:嵌入目的基因的慢病毒载体GV492测序正确;观察GFP表达以及流式分析检测表明KDR-CAR已经整合到Jurkat细胞中且稳定表达,Western blot以及RT-PCR检测表明KDR-CAR在目标细胞中获得高表达;肺癌细胞杀伤试验表明KDR-CAR-Jurkat细胞株对A549KDR细胞的杀伤效果良好;体内模型验证了KDR-CAR能够显著抑制A549KDR肺癌细胞移植瘤的生长。结论:本文已成功构建并筛选到稳定表达KDR-CAR-Jurkat细胞株,并利用体外实验和体内移植瘤模型检测了KDR-CAR修饰T淋巴细胞的抗肿瘤效果,为过继性免疫细胞抗肿瘤治疗提供了理论基础。
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研究背景:为了解决单一化疗选择性差、副作用大的临床治疗问题以及普通纳米粒在临床上的乏力表现,近几十年来开发了许多纳米载体系统,其治疗效果得到了不同程度的改善。然而,由于肿瘤复发中涉及耐药性和转移,因此单一化学疗法不再能满足多样化的治疗需求。最近,氧气供应纳米系统被证实可以从多方面提高治疗效果,运用这一概念将化疗-热疗法为主,氧气供应为辅,二者结合作为一种协同方法可能成为新的癌症治疗策略。本课题构建
现在人们多数工作节奏快、生活压力高,持续的应激反应导致生活不规律,出现睡眠不足或质量下降等症状,此时机体激活“下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA轴）”来维持内环境稳态。长期过度的应激反应更会使体内昼夜节律生物钟紊乱、进而导致神经功能调节失调、激素水平失衡和机体的物质代谢和能量代谢的紊乱。随着应激程度的加深和应激时间的延长导致机体自我调节修复的失代偿,将进一步诱发机体多系统多器官的病变和紊乱,如焦虑、失
肉类和鱼类因其富含蛋白质、脂肪酸、维生素等,具有重要的营养价值。但是,这些食物中的蛋白质在加工和储存过程中会发生分解,微生物通过释放氨基酸脱羧酶而产生生物胺（Biogenic amines,BAs）,其新鲜和腐败程度常以BAs的含量作为质量控制的评判标准。然而鱼肉中一些BAs含量较低,且样品基质较复杂,通常需要通过合适的前处理技术以富集分离和纯化,目前使用较为广泛的仍是固相萃取技术。但是常规的固相
电化学传感器由于其操作简单、成本低、快速检测、原位检测、灵敏性高、灵活性好等特点,引起了许多研究者的兴趣,成为了一种有吸引力的分析手段。其中阵列纳微电化学传感器在微型化和精细化方面做出了更多的努力,这使得它在生物分析方面表现出很大的应用潜力。不仅可以对分析物进行定性定量分析,还可以进行动态在线监测,为指导植物生长、生理机制探究、医药应用等提供一定的参考意义。本论文通过碳纳米管、电化学还原氧化石墨烯
聚酰胺胺（Poly（amino amine）s,PAAs）作为一类非病毒基因载体在近年来受到了研究者们的广泛关注,该类基因载体是由具有酰胺单体和胺单体的两类化合物通过迈克尔加成反应一步合成的一种拟肽聚合物。其中,具有二硫键的酰胺单体与胺单体反应合成的PAAs是一种更具优势的PAAs,这类PAAs又被称为聚二硫胺（Poly（disulfide amine）,SS-PAAs）。一种以N,N’-胱胺双丙
目的:通过纳米制剂技术,改善丹参酮进入体内后发生的快速分布和广泛消除,从而提升丹参酮的口服生物利用度,最终有效地克服种种机体屏障将丹参酮整体共递送到肿瘤细胞内发挥多组分协同抗肿瘤作用。方法:（1）通过文献调研法和指纹图谱检测并确定丹参酮提取物的指标性成分并进行含量测定;（2）采用薄膜蒸发-高压乳匀技术制备载丹参酮的共递药纳米粒并进行工艺优化,对得到的丹参酮纳米粒进行粒径、电位、多分散性评价,并通过
脂肪酶是一种可以水解甘油三酯（TAG）生成甘油二酯（DAG）,甘油单酯（MAG）等产物的酶类。脂肪酶作为一种催化剂,除了可以催化水解反应外,还可以催化酯化、酸解、醇解及转酯化等反应,具有反应条件温和、选择性强、副产物少等优点。游离脂肪酶稳定性相对较差,通过介孔固体材料SBA-15固定游离脂肪酶,可以有效提高脂肪酶的稳定性和重复利用性。SBA-15为亲水材料,通过后嫁接法将含有卤族元素的疏水基团引入
糖尿病目前已经成为对国民健康带来严重危害并给国内医疗体系带来巨大经济负担的重大公共卫生问题。目前诸多研究表明运动、饮食等生活行为习惯,这类可控的因素是影响慢性非传染性疾病发病率提升的主要原因之一。随着国内经济发展水平提高,人民生活质量升级,民众的健康素质也需要进一步得到提升,转变民众的健康意识从而改善可控因素,最终达到降低糖尿病的发病率的目的。健康素质的提升除了基层医疗卫生机构提供的健康教育服务外
生物活性玻璃（bioactive glass,BG）是一种形貌与粒径可控且具有良好的骨诱导性、生物相容性和生物活性的医用类硅酸盐纳米材料,在骨组织和软组织修复领域具有重要的研究意义和应用价值。随着制备工艺的不断优化,微乳液法逐渐成为制备纳米颗粒最常用的方法之一。与传统的熔融法和溶胶-凝胶法相比,微乳液法制备的纳米颗粒具有形貌可控、单分散性好、孔径可调和高比表面积等结构优势。因此,本文采用两种微乳液
纳米医学是一门交叉学科,近年来在肿瘤治疗中发展迅速。常规药物纳米化,能够有效提高药物的生物利用度,降低剂量和减少药物毒副作用。纳米药物递送系统具有肿瘤微环境响应性,能够定点释放药物,改变药物体内分布,从而有效提高抗肿瘤作用,已经成为纳米医学的研究热点。本论文将天然无机纳米材料-埃洛石纳米管（HNTs）分别用叶酸靶向分子（FA）和透明质酸靶向分子（HA）进行功能化,初步研究其抗肿瘤活性。具体内容如下