梗死心肌移植骨髓间充质细胞后单核细胞表型转化的研究

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目的:NR4A1对修复性Ly6Clow单核细胞的发育至关重要,有利于单核细胞/巨噬细胞发挥抗炎作用,探讨急性心肌梗死(AMI)移植骨髓间充质干细胞(MSCs)后Ly6Chigh单核细胞向Ly6Clow表型转化与Nr4a1的表达水平的相关性及对炎症及心肌重塑的作用。方法:将小鼠随机分成4组分别为假手术组、AMI组、AMI+CCR2受体拮抗剂组及AMI+CCR2受体拮抗剂+MSCs组。CCR2受体拮抗剂RS504393经腹腔注射,MSCs由小鼠骨髓中提取培养原代骨髓间充质干细胞,体外传代纯化培养至第四代,显微镜进行形态学鉴定及流式鉴定后,在心肌梗死部位多点注射。72h后收集4组小鼠血液、脾脏单核细胞,分别流式细胞术检测Ly6Chigh单核细胞、Ly6Clow单核细胞比例,Real-time PCR法、Western blot法检测血液Nr4a1表达水平。结果:骨髓间质干细胞培养纯化至第四代,形态单一,呈梭形,流式细胞仪鉴别检测显示:Sca-1表达阳性,CD45阴性,符合BM-MSCs表型特征。通过流式细胞术检测,AMI组外周血、脾脏中Ly6Chigh单核细胞和Ly6Clow单核细胞比例,与假手术组相比均有增加;AMI+CCR2受体拮抗剂组外周血、脾脏中Ly6Chigh单核细胞和Ly6Clow单核细胞比例与AMI组相比显著降低;AMI+CCR2受体拮抗剂+MSCs组外周血、脾脏,Ly6Chigh单核细胞比例较AMI+CCR2受体拮抗剂组比例降低,Ly6Clow单核细胞比例与AMI+CCR2受体拮抗剂组相比增加(P<0.001)。PCR与Western blot结果显示,AMI组Nr4a1表达水平与假手术组相比明显升高,AMI+CCR2受体拮抗剂组较AMI组降低,AMI+CCR2受体拮抗剂+MSCs组Nr4a1表达水平高于AMI+CCR2受体拮抗剂组(P<0.05)。结论:AMI小鼠在梗死心肌移植MSCs后,Nr4a1的表达增强,Ly6Chigh单核细胞向Ly6Clow单核细胞转化,Nr4a1的表达与Ly6Chigh单核细胞向Ly6Clow单核细胞转化有关。
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