本论文利用构建好的Pichia pastoris GS115/Albumin重组人血清白蛋白酵母工程菌表达系统进行了优化表达，获得了白蛋白含量为3.10g/l的发酵液，并对该发酵液进行了较深入的纯化工艺研究。 将生产菌株增菌培养至OD₆₀₀为2～6，收集菌体，用BMMY培养基悬浮菌体后进行发酵培养，定时补充甲醇。结果显示，诱导时间为96h时，既节约反应材料，又可以获得较高产量。 发酵液经离心得到发酵上清。取500ml上清进行热处理，60℃静置8h，离心后收集上清进行粗分级分离。 采用超滤与盐析两种浓缩手段对热处理上清进行粗分离，有效浓缩了该料液（液体体积由500ml减少到40ml，总蛋白浓度由6.08g/l增长到56.38g/l，热处理的总蛋白回收率达到85.3％，超滤的回收率达到92.1％，盐析的回收率则达到80.3％）。 在精细分离过程中，首先将盐析沉淀水溶液上疏水层析柱（Phenyl-Sepharose 6B），得到单一的洗脱峰。经此步骤后，发酵上清中的色素及绝大部分杂质被除去，回收率达到了69.8％，纯度达到了80.9％。洗脱峰经透析除盐后进行DEAE-SephadexA-50阴离子交换层析，上样后进行线性洗脱，白蛋白在B液比例增加到50％之后开始被洗脱下来，回收率达到81.4％。 所得到的洗脱成分经脱盐，浓缩后上HPLC检测，结果显示纯度为99％以上。SDS-PAGE显示为电泳一条带，且纯度优于SIGMA标品（BSA，纯度高于99％），基本达到了预期纯化目标。 沈阳药科大学硕士学位论文 摘要 本纯化工艺由热处理、超滤、盐析、疏水层析和阴离子交换 层析共5步组成，与文献报道的重组人血清白蛋白纯化工艺相 比，具有流程简单、易于放大和成本较低等优点，为本产品的工 业化生产奠定了基础。