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目的：构建hIL-10真核表达载体，探索在毕赤酵母中表达重组hIL-10蛋白，经纯化浓缩，获得较高纯度的目的蛋白并进行抗皮肤移植排斥的初步研究，为进一步研究hIL-10生物学功能和生物制品开发及临床应用奠定基础。
方法：(1)设计PCR引物，以质粒pORF-hIL-10为模板扩增hIL-10cDNA；(2)利用EcoRI/XbaI双酶切目的基因，并亚克隆至同样双酶切的载体pPICZaA中，构建真核表达质粒pPICZaA-hIL-10，转入E.coli DH5a进行质粒扩增，小量抽提重组质粒进行双酶切鉴定和DNA序列测定；(3)线性化重组质粒pPICZaA-hIL-10，电转化法，将其转入毕赤酵母，利用载体的ZeocinTM抗性筛选阳性转化子；(4)对所获阳性转化子进行高抗性筛选、Mut表型和PCR鉴定；(5)利用甲醇诱导目的基因表达，收集培养上清，SDS-PAGE和Western-Blot法分析鉴定目的蛋白，ELISA法检测目的蛋白表达水平；(6)用镍离子亲和层析柱FF纯化目的蛋白，聚乙二醇(PEG)浓缩后，SDS-PAGE、Bradford法和ELISA法分析纯化产物中目的蛋白的纯化效率；(7)设计同种异基因小鼠皮肤移植试验，用提取的重组hIL-10蛋白通过皮下注射的用药途径，观察重组蛋白对同种异基因小鼠皮肤移植排斥的影响。结果：(1)扩增出了hIL-10 cDNA，经琼脂糖凝胶电泳在550bp处可见单一条带，大小与预计相符合。用特异性引物测序，
结论：(1)成功构建了hIL-10的真核表达质粒pPICZaA-hIL-10。(2)分别获得Mut+和Mut+型转化子SMD1168/pPICZaA-hIL-10。(3)获得了一定量的hIL-10蛋白制品。(4)动物实验证实重组hIL-10对同种异基因小鼠皮肤移植排斥有抑制作用，可延长移植皮片存活时间。