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采用阳离子交换层析和凝胶过滤层析,从长白山白眉蝮蛇(Gloydius ussurensis)蛇毒中分离得到磷脂酶A<,2>的同源物,SDS-PAGE检测为一条单带,质谱检测分子量为13880.789;该蛋白49位氨基酸残基为Gln,将其命名为Gln49-PLA<,2>。Gln49-PLA<,2>具有肌肉毒性,神经毒性,但缺乏磷脂酶A<,2>活性。
Gln49-PLA<,2>对新鲜血浆和人纤维蛋白原的体外凝固作用结果表明:Gln49-PLA<,2>能够剂量依赖性地诱导新鲜的人血浆及纤维蛋白原溶液凝固。在实验剂量下,凝固时间分别从139.5±4.56min降到12.87±0.12min,从180.67±1.86s降到19.00±0.58s;同时,随着Gln49-PLA<,2>浓度的增大,血浆的复钙时间也明显缩短,从7.46±1.17min到0.75±0.33min。
通过Gln49-PLA<,2>对血浆凝血四项(凝血酶原时间PT,部分活化凝血酶时间APTT,凝血酶时间TT和纤维蛋白原浓度Fib)的影响,结果表明:Gln49-PLA<,2>不影响Fib、TT;能够使PT时间从12.4±0.29s缩短到6.95±0.20s;能够使APTT从39.22±0.88s延长到44.47±0.47s。Gln49-PLA<,2>不能激活凝血因子XⅢ,并且其凝血活性不受肝素和antithrombinⅢ抑制。Gln49-PLA<,2>具有精氨酸酯酶活力,以BAEE为底物所得的比活力为1747U/mg;且凝血酶比活为1100NIH thrombin U/mg。以上结果表明Gln49-PLA<,2>是一种类凝血酶。
Gln49-PLA<,2>具有纤维蛋白原水解活性,优先迅速水解纤维蛋白原Aα链,释放纤维蛋白多肽A(FPA)。随着作用时间的延长(大于10小时),纤维蛋白原Bβ链也能被缓慢水解,释放纤维蛋白多肽B(FPB),且其水解活性及凝血活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF(苯甲磺酰氟)的抑制,但是不受金属蛋白酶抑制剂EDTA的抑制。由此判定Gln49-PLA<,2>应该属于丝氨酸蛋白酶。
Gln49-PLA<,2>引起的血液凝固作用主要是水解纤维蛋白原,但与凝血级联反应中的凝血酶有本质不同,不能引起纤维蛋白交联。因此,Gln49-PLA<,2>应该是一种新的类凝血丝氨酸蛋白酶。