由于环境恶化、过度捕捞、保护不利等诸多因素，目前渔业资源日益稀少，许多优良　　 鱼种种质退化明显，越来越多的珍稀鱼类濒临灭绝的边缘。超低温冷冻技术可有效的保存精子，从而对濒危物种和优良种质实施保护。但鱼类的生存环境多样，物种繁多，单纯依靠从哺乳动物和人类精子冻存中获得的经验难以满足需求。需要更多鱼类精子超低温冷冻方面的理论和应用研究。　　 本实验建立或优化了青石斑鱼(Epinephelus awoara)、花鱼骨(Hemibarbusmaculatus)、黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)、赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)和鲤鱼(Cyprinus carpio)等鱼类精子冷冻方案。通过对精子激活特点的研究，发现青石斑鱼对不同成分的激活溶液表现出了不同的敏感性，葡萄糖最为敏感，但是和其他两种溶液相比较，只存在敏感性差异的问题，各种溶液激活效果的最大值并无显著的差异。花鱼骨和黄颡鱼两种淡水鱼类的精子对于渗透的敏感性均存在有明显的种间和种内差异性，花鱼骨精子更容易被激活。抗冻剂的加入引起了青石斑鱼精子的明显激活，几种抗冻剂中，甘油的激活效应最为强烈，DMSO和EG相对较弱。抗冻剂渗透压带来的高渗所引起的海水鱼类精子的激活是可以预见的，而对于淡水鱼类，这种高渗激活现象的发现则显得违反常规。HBSS300搭配10％的DMSO作为冻存液稀释花鱼骨的精子，会使得平衡过程中精子逐渐的自发激活。这种自发激活与基础稀释溶液的渗透压高低之间的联系在黄颡鱼精子的实验中予以证实:在接近或低于精子激活渗透压(P0)的溶液中才会发生自发激活，当高于P0一定程度时（例如40个单位）则不会发生，并且，在抗冻剂浓度为10％时，DMSO最容易引起自发激活，EG次之，甘油不仅不会引起自发激活，反而会阻碍精子的激活。通过对几种鱼类冷冻速率的筛选，发现青石斑鱼、赤点石斑鱼、花鱼骨、黄颡鱼鲤鱼等鱼类精子的最佳降温速率分别为置于液氮面上方3-7cm、7cm、7cm、9cm和3cm的位置。通过对抗冻液筛选，发现CF-HBSS300+10％ EG+30mg/ml海藻糖最适于青石斑鱼精子的冻存，生理盐水+10％DMSO+30mg/ml海藻糖最适合用于赤点石斑鱼的精子冷冻，D-17与10％DMSO搭配最有利于花鱼骨的精子冷冻。通过优化的冻存方案得到的青石斑鱼冻精的受精效果较鲜精有明显的下降，但仍具有一定的应用价值。用花鱼骨的鲜精与冻精进行受精，孵化率分别为别为40±3.61％和46±4.58％，二者之间并无显著性差异。　　 在获得多种鱼类冻存方案基础之上，进一步研究膜脂与鱼类精子冷冻间的关系。通过实验室前人建立的高效液相色谱检测方法以及条件对大黄鱼、赤点石斑鱼、青石斑鱼等鱼类的鲜精和冻精进行脂质含量的检测发现，冻精中CHO、PC、PE，均出现了显著性的减少，SM则由于其本身含量太少以及检测精度的问题未能检测出显著的流失。通过控制冷黄颡鱼精子冻方案的优劣，发现较好方案和较差方案其脂质流失相对于鲜精来说是显著的，但两种方案之间的并无显著性的差异。这说明，除却脂质的流失之外，还存在有其他的可导致损伤的因素。在脂质转入实验中，胆固醇和卵磷脂的转入均无法显著提高大黄鱼的冻精质量。但是，胆固醇的转入可以使得黄颡鱼精子对降温速率的敏感性降低，卵磷脂脂质体的加入也降低了斑马鱼精子对降温速率的敏感性，并提高了冻精活力。　　 实验过程中意外的发现了鞘磷脂脂质体对于斑马鱼精子具有凝集作用，鞘磷脂含量为0.25ug/ml的鞘磷脂脂质体即可引起明显的凝集，并发现脂质体中其他脂质成分(PC、CHO)的存在可以干扰鞘磷脂的凝集作用。然而，这种凝集作用仅对鲤科和脂鲤科鱼类的精子有效。此外还发现鞘磷脂可能参与了冷冻过程中精子凝集。