研究背景:历史上多次流感大流行均与禽流感相关,孕期女性感染高致病禽流感将会对其自身生命及胎儿安全造成严重威胁。统计数据表明在过去发生的流感大流行期间,妊娠期女性与同龄未孕女性或普通人相比具有更高的发病率和死亡率,尤其在孕中期和孕晚期,但其潜在分子机制尚未明确。流感病毒可以通过其上的血凝素（Hemagglutinin,HA）特异性识别并结合宿主细胞表面的末端唾液酸（Sialic acid,Sia,SA）糖链受体,从而开启对宿主的入侵。而唾液作为人体体液免疫的第一道防线,具有较强的抗流感病毒活性,唾液中含有大量的可溶性糖蛋白,这些糖蛋白上的唾液酸糖链可以通过与流感病毒血凝素结合,封闭流感病毒血凝素上的抗原表位,从而抵抗病毒的入侵。大量研究表明唾液中的糖蛋白糖链可随性别、年龄以及疾病状态等发生改变,在本研究中我们系统地研究了孕期和产后各阶段女性唾液中唾液酸糖链表达变化及其对禽流感病毒中和能力的影响,以期为揭示该群体禽流感病毒的易感分子机制,以及为该群体的禽流感预防提供一定的实验基础。实验方法:本研究共采集正常未孕女性、处于妊娠期各阶段的女性以及产后各阶段女性唾液共计1200例,将其分为未孕期（HN）、孕早期（FT）、孕中期（ST）、孕晚期（TT）、产后早期（FP）、产后中期（SP）、产后晚期（TP）等七组。首先,利用凝集素芯片技术对各组混合唾液样本中SNA所识别的Siaα2-6Gal糖链以及MAL-II所识别的Siaα2-3Gal糖链表达水平进行了比较分析,并应用高碘酸-间苯二酚法对每组样本的唾液酸含量进行了定量测定。此外,利用唾液芯片技术对每组个例样本中的唾液酸表达水平进行了验证。之后,利用SDS-PAGE和凝集素印迹实验对唾液中含有唾液酸糖链的糖蛋白及其表达变化进行了确定,并利用病毒印迹实验分析随着唾液酸糖链表达水平的变化,各组唾液样本与三株禽流感病毒（H5N1-CK、H5N1-DK、H9N2）以及H1N1人流感疫苗的结合强度及其变化。最后,应用Western blotting和ELISA方法对唾液中含量丰富的糖蛋白MUC5B和IgA分别进行了针对性研究,对其蛋白表达水平以及Siaα2-3/6Gal唾液酸化表达水平进行了分析验证。实验结果:凝集素芯片数据结果显示,与HN相比,特异性识别Siaα2-6Gal结构的凝集素SNA荧光信号归一化值（Normalized Fluorescent Intensities,NFIs）在FT、ST、TT、FP、SP、TP组中没有显著性差异;而对于凝集素MAL-II,NFIs显示其特异性识别的Siaα2-3Gal结构在FT、ST、TT、FP、SP、TP各组中发生了显著的表达变化,尤其在孕中期和孕晚期显著性下调（fold change=0.53 and 0.37,p＜0.001）,唾液芯片验证个例结果与凝集素芯片结果一致。各组样本的唾液酸含量定量测定结果表明唾液中糖蛋白上结合的Siaα2-3Gal含量从健康未孕组的2.08%下降至孕晚期的0.78%,而具有α2-6-或其它连键结构的唾液酸变化不大。凝集素印迹结果进一步显示,在孕期及产后女性唾液蛋白中共有三个蛋白条带具有明显的Siaα2-3Gal糖链结构修饰,且其表达水平在孕期女性唾液组中均发生明显下调,并在产后逐渐恢复,这与凝集素芯片结果高度吻合。病毒印迹结果显示孕中期和孕晚期女性唾液糖蛋白与禽流感病毒H5N1-CK、H5N1-DK、H9N2和H1N1疫苗的结合能力显著降低,但H1N1流感病毒疫苗与唾液蛋白的结合能力与三株禽流感病毒相比差异较小,这些变化与各种样本中Siaα2-3Gal唾液酸化水平变化显著相关。Western blotting和ELISA分析结果显示妊娠期女性唾液中IgA和MUC5B的蛋白水平变化不大,而其Siaα2-3Gal唾液酸化糖链表达变化主要来自于糖基化水平。实验结论:妊娠中晚期女性唾液中Siaα2-3Gal表达水平明显降低,并显著影响其对禽流感病毒的结合能力,产后女性唾液中Siaα2-3Gal表达水平以及其抵抗禽流感病毒的能力逐渐恢复。本实验结果表明孕期女性唾液中Siaα2-3Gal表达水平下降是造成该时期女性禽流感易感的关键因素之一,这些结果可能为妊娠期女性禽流感的预防和控制提供新的思路。