论文部分内容阅读
链格孢酚(AOH)属于真菌毒素,是链格孢霉产生的有毒次级代谢产物之一,具有致癌、致畸和致突变作用。近年来,在大量谷物、果蔬及其制品的真菌毒素含量的检测中均发现了链格孢酚的残留,链格孢酚已经严重危害到人类的健康,因此加强对农产品中链格孢酚的检测监控十分重要。目前链格孢酚的分析方法主要是液相-质谱法,该方法准确可靠,常作为确证方法,但存在设备昂贵、需要专业人员、前处理繁琐耗时、样品通量低等不足。免疫检测技术具有灵敏、快速、速高通量等特点,可与色谱、质谱等仪器确证技术搭配应对量大面宽的农产品、食品安全快速筛查需求,近年来已成为研究热点。本文以链格孢酚为对象,设计合成了多个半抗原并制备了AOH多克隆抗体,建立了链格孢酚间接竞争酶联免疫分析法和间接竞争化学发光酶联免疫分析法,研究内容如下:(1)设计并合成了AOH毒素及4种相关的半抗原,通过活泼酯法、N,N-羰基二咪唑法、曼尼希法偶联载体蛋白获得四种免疫原AH1-BSA、AH2-BSA、AM-BSA、AC-BSA,经鉴定,抗血清AH2、AC均非为特异性吸附,抗血清AH1、AM的效价分别为1:32000和1:128000,对1μg/mL的AOH毒素抑制率为89.5%,37.4%,基于此制备了针对AOH毒素的高特异性多克隆抗体。(2)建立了AOH间接竞争ELISA(AOH-icELISA),方法的检测限为0.31μg/L,IC50为2.62μg/L,线性检测范围为0.46~15.08μg/L;与其余链格孢酚毒素及结构类似物交叉反应率均<0.1%,方法特异性好,批内批间的变异系数均<15%,方法精密度高,谷物、果汁样品经前处理优化和倍比稀释法消除基质效应,平均添加回收率在77.20~115.37%之间,表明方法适用于实际样品的检测。(3)建立了AOH间接竞争CLEIA(AOH-icCLEIA),方法的检测限为0.068μg/L,IC50为0.37μg/L,线性检测范围为0.11~1.23μg/L;与其余链格孢酚毒素及结构类似物交叉反应率均<0.1%,方法特异性好,批内批间的变异系数均<15%,方法精密度高,谷物、果汁样品经前处理优化和倍比稀释法消除基质效应,平均添加回收率在72.67~115.80%之间,表明方法适用于实际样品的检测。