论文部分内容阅读
目的:探讨黄芪注射液对小儿急性期川崎病(KD)外周血单个核细胞(PBMC)核转录因子(NF-κB)活化的影响和对炎症细胞因子TNF-α表达的效用。方法:采用Ficoll密度梯度离心法常规分离各受试对象的外周静脉血,获得PBMC,将其分编为五组:①空白组(自然培养),②PMA培养组(只加入终浓度为20nmol/L的NF-κB激动剂PMA),③PMA(终浓度20nmol/L)+黄芪注射液(终浓度25mg/ml)培养组,④PMA(终浓度20nmol/L)+黄芪注射液(终浓度50mg/ml)培养组,⑤PMA(终浓度20nmol/L)+黄芪注射液(终浓度100mg/ml)培养组,在37℃、5%CO2及相对湿度为95%的培养箱内进行培养。免疫细胞化学方法观察培养后各组PBMC内NF-κB的活化水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)双抗体夹心法测定培养后上清液中TNF-α的表达含量。结果:(1)在自然培养下,正常对照(Normal)组和KD组PBMC中均可出现一定量的NF-κB活化,其培养上清液中也有TNF-α的表达,KD组显著高于Normal组,差异有统计学意义(P = 0.000);(2)加入PMA刺激培养后,两组PBMC中NF-κB阳性细胞百分比均显著升高,同时培养上清液中TNF-α的表达量也明显升高,KD组仍明显高于Normal组,差异有统计学意义(P = 0.000);与自然培养组比较差异也有统计学意义(P = 0.000);(3)分别加入不同浓度的黄芪注射液(25mg/ml、50mg/ml、100mg/ml)后,可以观察到对PMA刺激的PBMC中NF-κB活化细胞百分比明显降低,相应的PBMC培养上清液中TNF-α的表达量也随之降低,但KD组仍然高于Normal组,差异有统计学意义(P = 0.000);与PMA组比较有统计学意义(P = 0.000);与自然培养组相比差异无统计学意义(P>0.05);(4)三组不同浓度的黄芪注射液随着剂量的增大,数据似乎有减小的趋势,但其差异无统计学意义(P>0.05);(5)NF-κB活化的阳性细胞百分比与TNF-α的表达含量呈正的直线相关(r =0.601,P = 0.005)。结论:黄芪注射液在KD急性期的主要抗炎作用机制是抑制了NF-κB的活化,同时也抑制了炎症细胞因子TNF-α的表达。