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厄贝沙坦(irbesartan)为血管紧张素Ⅱ受体拮抗药。能特异性地拮抗AT1,通过选择性地阻断血管紧张素与AT1受体的结合,抑制血管收缩和醛固酮的释放,从而产生降压作用。体外实验显示厄贝沙坦主要由细胞色素P450酶CYP2C9氧化代谢,同工酶CYP3A4几乎没有效应,
氟伐他汀(fluvastatin)是第一个全合成的降血脂药物,和辛伐他汀(simvastatin)都是羟甲戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,具有抑制内源性胆固醇(Cholesterol)的合成,降低肝细胞内胆固醇的含量,刺激低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)受体的合成,有效降低血液中低密度脂蛋白胆固醇及甘油三脂水平,升高高密度脂蛋白胆固醇水平。是临床常用的血脂调节药。
由于临床高血压患者常伴有肥胖和甘油三酯/胆固醇水平的升高,辛伐他汀、氟伐他汀临床常与降压药厄贝沙坦联用。厄贝沙坦在肝脏主要经CYP2C9代谢。辛伐他汀在肝脏中主要经CYP3A4代谢,大多数降血脂药物均经此酶代谢。由于药物体内过程非常复杂,经不同种代谢酶代谢的药物是否存在相互作用,还需进一步探讨。氟伐他汀经CYP2C9代谢,且为CYP2C9抑制剂,与厄贝沙坦为同一种酶代谢,可能会对厄贝沙坦的代谢有影响,有关此方面的研究尚未见报道。因此,研究二者与厄贝沙坦的相互作用具有重要的临床意义。
目的:
1.建立HPLC-荧光法检测新西兰大白兔体内厄贝沙坦血药浓度的方法;
2.探讨辛伐他汀相同剂量(5mg/kg)诱导不同时间(3天和5天)对新西兰大白兔体内厄贝沙坦药代动力学的影响;
3.探讨氟伐他汀不同剂量(10mg/kg和50mg/kg)诱导3天对新西兰大白兔体内厄贝沙坦药代动力学的影响。
方法:
1.动物实验:新西兰大白兔随机分为6组,分别是:3天对照组:2％羧甲基纤维素(灌胃10ml/只,1次/日,连续3天)+厄贝沙坦(灌胃50mg/kg);5天对照组:2％羧甲基纤维素(灌胃10ml/只,1次/日,连续5天)+厄贝沙坦(灌胃50mg/kg);辛伐他汀3天组:辛伐他汀(灌胃5mg/kg,1次/日,连续3天)+厄贝沙坦(灌胃50mg/kg);辛伐他汀5天组:辛伐他汀(灌胃5mg/kg,1次/日,连续5天)+厄贝沙坦(灌胃50mg/kg);氟伐他汀低剂量组:氟伐他汀(灌胃10mg/kg,1次/日,连续3天)+厄贝沙坦(灌胃50mg/kg);氟伐他汀高剂量组:氟伐他汀(灌胃50mg/kg,1次/日,连续3天)+厄贝沙坦(灌胃50mg/kg)。分别在灌胃给予厄贝沙坦前和给药后0.25,0.5,1,1.5,2,3,5,7,9,12,24,36小时时从新西兰大白兔耳中动脉取血2ml,以10000rmin-1离心10分钟分离血浆,储存于-80℃低温冰箱。
2.血浆处理方法:以替米沙坦为内标,乙醚-二氯甲烷(7:3)提取的方法处理血浆。HPLC-荧光法测定血浆中厄贝沙坦的浓度。
3.色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18,流动相为水-乙腈(57:43),三乙胺0.1％,磷酸调pH=3.00,荧光激发波长为254nm,发射波长为371nm,流速为1.0 mL·min-1,柱温为室温。
4.数据处理:测得的血药浓度-时间数据用DA.S version3.0(BontzInc.,Beijing,China)进行智能化处理,分别计算出各组厄贝沙坦的药代动力学参数。Cmax和Tmax为实验测得。主要药代动力学参数用SPSS软件包进行统计分析。
结果:
1.HPLC-荧光法测定新西兰大白兔体内厄贝沙坦血药浓度的方法:替米沙坦和厄贝沙坦的保留时间分别为4.2min和5.9min,厄贝沙坦检测浓度在0.05μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9998),最低检测浓度为O.025μg·mL-1。低、中、高3种浓度(0.08、0.8、4μg·mL-1)的平均相对回收率分别为(98.44±3.15)％、(102.21±5.33)％、(101.19±6.32)％,提取回收率为(78.04±6.67)％,日间、日内RSD均小于10％。样品多次冻融及在-20℃冰箱长期放置稳定性良好。
2.各组厄贝沙坦的统计矩药代动力学参数分别是:
3天对照组:2％羧甲基纤维素(I.g.10ml/只,1次/日,连续3天)+厄贝沙坦(I.g.50mg/kg):AUC(0-36):10.03±4.81;AUC(0-∞):11.94±5.67;tmax:1.34±0.24;Cmax:2.38±1.83;t1/2:4.37±1.09;CL:10.53±5.29;MRT(0.36):5.09±1.42;MRT(0-∞1:6.04±1.34
5天对照组:2％羧甲基纤维素(I.g.10ml/只,1次/日,连续5天)+厄贝沙坦(I.g.50mg/kg):AUC(0.36):9.88±9.07;AUC(0-∞):10.23±9.00;tmax:1.34±0.22:Cmax:2.38±2.56:t1/2:4.25±2.05;CL:11.48±8.37:MRT(0-36):5.14±1.35;MRT(0-∞):6.13±1.62
辛伐他汀诱导3天组:辛伐他汀(I.g.5mg/kg连续3天)+厄贝沙坦(I.g.50mg/kg);AUC(0.36):11.51±4.81;AUC(0-∞):15.43±7.44;tmax:1.61±1.14:Cmax:3.14±0.92;t1/2:6.36±5.70;CL:4.00±1.98;MRT(0.36):5.18±3.58;MRT(0-∞):7.80±5.65
辛伐他汀诱导5天组:辛伐他汀(I.g.5mg/kg连续5天)+厄贝沙坦(I.g.50mg/kg);AUC(0.36):22.65±8.59;AUC(0-∞):31.63±14.09;tmax:0.83±0.26;Cmax:6.35±3.50;t1/2:10.53±5.40;CL:1.77±0.53;MRT(0-36):8.83±2.85;MRT(0-∞):18.94±9.66
氟伐他汀低剂量组:氟伐他汀(I.g.10mg/kg连续3天)+厄贝沙坦(I.g.50mg/kg);AUC(0.36):7.69±3.21;AUC(0-∞):8.69±3.05;tmax:0.67±0.20;Cmax:3.58±1.70;t1/2:2.74±0.77;CL:6.43±2.33;MRT(0.36):2.86±0.82;MRT(0.∞):4.17±2.72
氟伐他汀高剂量组:氟伐他汀(I.g.50mg/kg连续3天)+厄贝沙坦(I.g.50mg/kg);AUC(0.36):19.35±7.50;AUC(0-∞):20.49±7.72:tmax:0.88±0.19;Cmax:4.48±2.80;t1/2:8.73±2.65;CL:2.79±1.15;MRT(0.36):8.31±2.39;MRT(0-∞)18.86±4.32
经统计分析,与对照组比较,辛伐他汀(5mg/kg)诱导三天对厄贝沙坦的药代动力学无影响(P＞0.05);辛伐他汀(5mg/kg)诱导五天对厄贝沙坦的药代动力学有显著影响,诱导组的主要药代参数AUC(0-36)、AUC(0-∞)、MRT(0-36)、MRT(0-∞)、Cmax显著增加(P＜0.05)CL显著降低(P＜0.05);氟伐他汀低剂量(10mg/kg)诱导三天对厄贝沙坦的药代动力学无影响(P＞0.05):氟伐他汀高剂量(50mg/kg)诱导三天对厄贝沙坦的药代动力学有影响,诱导组的t(1/2)和MRT(0-36)显著延长(P＜0.05),CL显著降低(P＜0.05),对其他药代参数无影响(P＞0.05)。
结论:
1.本实验建立的检测方法简便、快速、准确、特异性和灵敏度高,可用于厄贝沙坦的血药浓度测定和药动学研究。
2.辛伐他汀(5mg/kg)诱导3天对新西兰大白兔体内厄贝沙坦的药代动力学无影响;辛伐他汀(5mg/kg)诱导5天显著影响新西兰大白兔体内厄贝沙坦的药代动力学,临床上厄贝沙坦与辛伐他汀长期联用时,需密切监护,必要时要减少剂量。
3.氟伐他汀低剂量(10mg/mg)诱导3天对新西兰大白兔体内厄贝沙坦的药代动力学无影响;氟伐他汀高剂量(50mg/kg)诱导3天显著影响新西兰大白兔体内厄贝沙坦的药代动力学,t1/2、MRT(0-36)显著延长并且CL显著降低。因此两药临床联用时,尤其氟伐他汀剂量较大时,要实施监测,必要时调整厄贝沙坦的给药间隔。