SLE是一种以免疫性炎症为突出表现的自身免疫性疾病,以血清中出现抗核抗体为代表的多种自身抗体和多器官受累为主要临床特征,肾脏是最常见的受累器官。由SLE累及肾脏所导致的肾脏损伤即为LN,肾脏的损伤程度是导致SLE患者预后是否良好的重要因素。当前LN的治疗主要依靠临床用药,其中糖皮质激素(GC)和免疫抑制剂是临床上治疗LN的两种基本药物,但长期大量应用会并发感染,诱发库欣综合征、骨质疏松症、胃肠道刺激、性腺功能减退等毒副作用。鉴于LN为SLE患者最常见且严重的并发症,以及目前治疗药物及手段的有限性,有必要进一步研究针对LN的新的有效治疗手段。趋化因子是一类能够趋化细胞定向运动的小分子碱性蛋白,由70-125个氨基酸组成,其相对分子质量多在6-14 k D之间。至今研究者们已经发现了超过五十种趋化因子,并将其归类为4个不同的亚族,即C、CC、CXC以及CX3C。趋化因子及其受体对细胞生长发育等生理过程的调控和涉及的包括免疫系统发育及应答、炎症反应、肿瘤发生发展、创伤修复等在内的多种病理过程被逐一发现,并且越来越多的研究表明趋化因子参与了LN的发病。CXCL13又称为B细胞吸引趋化因子(BCA-1),是定向趋化B细胞的主要调节因子。大量研究表明CXCL13在SLE患者和动物模型的血清中高表达,并且与疾病活动度及严重性相关。有研究进一步表明CXCL13在SLE小鼠的肾小球组织中表达上调。CXCL13因而被认为是SLE的生物标志物和SLE治疗的潜在作用靶点。因此,我们推测利用抗CXCL13单克隆抗体抑制CXCL13的活性可能是治疗LN的有效手段。本研究利用抗CXCL13单克隆抗体治疗MRL/lpr狼疮鼠,探讨CXCL13作为LN治疗靶点的可能性,并阐明其治疗机制。本论文研究主要由以下三部分组成:第一:抗CXCL13单克隆抗体改善MRL/lpr狼疮鼠的肾脏损害。蛋白尿常被作为判断肾脏病变的标志和客观指标。血清Cr的浓度变化主要由肾小球的滤过能力来决定,血清Cr水平增高多意味肾脏病变。本试验将24只14周龄雌性MRL/lpr狼疮鼠平均分为2组,A组经抗CXCL13单克隆抗体50μg,每日1次腹腔注射治疗,B组注射同种型Ig G50μg,每日1次腹腔注射治疗作为对照,同时设C组14周龄的雌性C57BL/6小鼠6只作为正常肾组织对照组。为评价肾功能,于治疗后第14、16、18及20周采集A、B两组24小时尿液,通过Cr测定试剂盒和Bradford蛋白浓度测定试剂盒分别检测小鼠血清中Cr含量及尿蛋白含量,同时采用HE染色法及镜检观察3组小鼠肾组织发生的病变。结果显示,B组小鼠肾损伤严重,24小时尿蛋白含量随鼠龄的增加而持续增长,血清中Cr含量也增高;相比之下,A组狼疮鼠24小时尿蛋白含量虽然也随鼠龄的增加而呈增长趋势,但其尿蛋白含量计分在治疗后18周与B组比较出现统计学差异(P<0.05),20周时显著减低(P<0.01);血清中Cr含量与B组相比也显著减少(P<0.01)。HE染色结果表明,A组狼疮鼠肾组织损伤程度与B相比有所缓解,系膜增生和基质扩张程度减轻、肾小球炎症细胞浸润减少,肾小球及血管周围评分减低。提示抗CXCL13单克隆抗体能延缓MRL/lpr狼疮鼠病情进展,改善肾脏损害。第二:抗CXCL13单克隆抗体治疗减少MRL/lpr狼疮鼠肾组织中免疫复合物的沉积、以及血清中ds DNA抗体以及肾组织中炎症因子IL-33、IL-1β、IL-6和IL-17的表达水平。分组(A、B两组)及给药方法同上。治疗后用免疫荧光染色检测免疫复合物在肾组织中的沉积情况,再采用ELISA方法分别检测血清中Anti-ds DNA抗体水平以及肾组织中炎症因子IL-33、IL-1β、IL-6和IL-17的表达情况。A组MRL/lpr狼疮鼠经抗CXCL13单克隆抗体治疗后,与B组相比,MRL/lpr狼疮鼠Ig G和C3免疫复合物沉积显著减少,免疫荧光强度评分减低(P<0.01),血清Anti-ds DNA抗体水平显著下降(P<0.01),炎症因子IL-33、IL-1β、IL-6和IL-17的表达量也显著下降(P<0.01)。提示抗CXCL13单克隆抗体治疗能够减轻MRL/lpr狼疮鼠肾脏损害可能是通过减少血清中Anti-ds DNA抗体水平、以及肾组织中免疫复合物的沉积和肾组织中炎症因子起作用。第三:抗CXCL13单克隆抗体治疗降低MRL/lpr狼疮鼠Thl7/Treg细胞比率并改善MRL/lpr狼疮鼠的生存率。分组及给药方法同上。本试验中,MRL/lpr狼疮鼠分别经抗CXCL13单克隆抗体和Ig G治疗后,通过流式细胞术检测脾脏中Treg及Th17细胞数量及其比率,体外观察并记录各组小鼠的存活情况。结果显示,抗CXCL13单克隆抗体治疗后MRL/lpr狼疮鼠脾脏Treg细胞数量上升而Th17细胞数量下降,与B组相比Thl7/Treg比率显著下调(P<0.01);体外观察结果显示,与B组相比,MRL/lpr狼疮鼠经抗CXCL13单克隆抗体治疗后存活率显著提升(P<0.01)。提示抗CXCL13单克隆抗体可以下调Thl7/Treg比率并改善LN小鼠的存活率。本研究的创新之处在于:第一,本研究首次应用抗CXCL13单克隆抗体治疗MRL/lpr狼疮鼠,观察其治疗效果。第二,首次通过实验证明抗CXCL13单克隆抗体治疗能降低MRL/lpr狼疮鼠尿蛋白及血清中肌酐含量,减轻肾组织的病理损伤程度;抗CXCL13单克隆抗体治疗减少MRL/lpr狼疮鼠肾组织中免疫复合物的沉积、降低血清中ds DNA抗体水平,同时使肾组织中相关炎性因子IL-33、IL-1β、IL-6和IL-17的表达水平减低;抗CXCL13单克隆抗体治疗可以下调Thl7/Treg比率,并提高MRL/lpr狼疮鼠的存活率。第三,本研究通过动物实验验证了抗CXCL13单克隆抗体对MRL/lpr狼疮鼠肾炎治疗有效,并阐明其作用机制可能与肾组织中免疫复合物的沉积、血清中Anti-ds DNA抗体水平,肾组织中相关炎性因子水平,Thl7、Treg细胞水平的调控有关,认为抗CXCL13单克隆抗体可以作为治疗MRL/lpr狼疮鼠肾炎的有效治疗靶点,其作为一种LN治疗的候选药物,具有潜在的临床实用价值,为LN的临床治疗提供了一种可能的新途径。