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第一部分急性心肌缺血大鼠心肌glycogen synthase kinase-3β/β-catenin信号通路蛋白的变化目的:观察大鼠急性心肌缺血过程中心肌组织GSK-3β及β-catenin蛋白表达水平的变化。方法:1健康雄性SD大鼠(270±20g)40只,随机分成5组:(1)假手术组;(2)缺血2h组;(3)缺血3h组;(4)缺血6h组;(5)缺血9h组。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支(LAD)建立急性心肌缺血模型。大鼠麻醉后连接心电图,记录术前II导联心电图,消毒手术区域,术后2min再次记录心电图的变化,以S-T段较术前抬高0.15mv以上作为造模成功。假手术组大鼠只穿线不结扎。2缺血组分别于缺血后2h、3h、6h和9h用Powerlab8/s多通道生理记录仪记录各组大鼠的平均动脉压(MAP)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室压力变化速率(dp/dtmax,dp/dtmin)。3取血分离血清,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性。4取心脏,HE染色观察心肌组织形态学变化。5蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-GSK-3β、t-GSK-3β和β-catenin蛋白表达水平。结果:1与假手术组大鼠比较,心肌缺血3h、6h、9h时,MAP、LVDP、dp/dtmax、dp/dtmin均明显降低(P<0.01),LVEDP显著升高(P<0.01);2与假手术组大鼠比较,心肌缺血3h、6h、9h血清中LDH活性均显著升高(P<0.01);3假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,着色均匀。心肌缺血6h及缺血9h组大鼠心脏部分区域心肌纤维横纹不齐或消失,核偏移甚至裂解消失,有炎症因子渗出;4各组大鼠心肌组织中t-GSK-3β的表达无显著变化,与假手术组大鼠比较,缺血3h、6h、9h组大鼠心肌p-GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β、β-catenin蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。第二部分硫化氢通过glycogen synthase kinase-3β/β-catenin信号途径介导心肌损伤后抗细胞凋亡作用目的:观察硫化氢外源性供体硫氢化钠(Sodium hydrosulfide,Na HS)对大鼠急性心肌缺血组织细胞凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:1健康雄性SD大鼠(270±20g)56只,随机分成7组:(1)假手术组;(2)心肌缺血组;(3)心肌缺血+Na HS低剂量(0.78mg/kg,i.p.)组;(4)心肌缺血+Na HS中剂量(1.56mg/kg,i.p.)组;(5)心肌缺血+Na HS高剂量(3.12mg/kg,i.p.)组;(6)心肌缺血+SB216763(0.6mg/kg,i.v.)组;(7)心肌缺血+溶剂对照(1%DMSO,2ml/kg,i.v.)组。各组大鼠均于缺血3h给药,术后6h处死并取材。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血模型。假手术组大鼠只穿线不结扎。2用Powerlab8/s多通道生理记录仪记录各组大鼠平均动脉压(MAP)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室压力变化速率(dp/dtmax,dp/dtmin)。3取血分离血清,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性。4取心脏,HE染色观察心肌组织形态学变化。5 TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率。6 Western blot检测p-GSK-3β、t-GSK-3β、β-catenin、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。免疫组织化学法(IHC)测定β-catenin、Bax和Bcl-2表达。结果:1与假手术组大鼠比较,心肌缺血组大鼠MAP、LVDP、dp/dtmax、dp/dtmin均显著降低(P<0.01),LVEDP显著升高(P<0.01)。与心肌缺血组大鼠比较,心肌缺血+Na HS低、中、高剂量组大鼠MAP、LVDP、dp/dtmax、dp/dtmin均显著升高(P<0.05或P<0.01),LVEDP显著降低(P<0.01);2与假手术组大鼠比较,心肌缺血组大鼠血清LDH活性显著升高(P<0.01)。与心肌缺血组比较,心肌缺血+Na HS低、中、高剂量组大鼠血清LDH活性显著降低(P<0.05或P<0.01);3 HE染色光镜观察心肌组织形态学变化:假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,着色均匀。心肌缺血组大鼠部分区域心肌纤维横纹不齐或消失,核偏移甚至裂解消失,有炎性因子渗出,心肌缺血+Na HS低、中、高剂量组大鼠也有心肌细胞变性的改变,但程度较缺血组轻;4与假手术组大鼠比较,心肌缺血组大鼠心肌细胞凋亡率、Bax表达水平显著升高(P<0.01),Bcl-2表达水平显著降低(P<0.01)。与心肌缺血组大鼠比较,心肌缺血+Na HS低、中、高剂量组大鼠心肌细胞凋亡率、Bax表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01);5与假手术组大鼠比较,心肌缺血组p-GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β、β-catenin表达水平均显著降低(P<0.01)。与心肌缺血组大鼠比较,心肌缺血+Na HS低、中、高剂量组大鼠心肌p-GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β、β-catenin表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);6与心肌缺血+溶剂对照组大鼠比较,心肌缺血+SB组大鼠心肌组织中p-GSK-3β与β-catenin表达均显著增加(P<0.01),此外心肌缺血+SB组大鼠可显著升高MAP、LVDP、dp/dtmax、dp/dtmin(P<0.01),降低LVEDP(P<0.01),降低血清中LDH活性(P<0.01),降低心肌细胞凋亡率以及Bax/Bcl-2水平(P<0.01)。结论:1在急性心肌缺血大鼠心肌组织中t-GSK-3β表达水平无明显变化,而p-GSK-3β和β-catenin表达水平均显著降低。2硫化氢可显著减轻急性心肌缺血引起的心肌细胞凋亡。3硫化氢的抗心肌细胞凋亡作用机制可能与GSK-3β/β-catenin信号途径有关。