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猪苓[Polyporus umbellatus(Pers.)Fr.]是一种药用真菌,具有利尿去水肿的作用;它的生长经历有三个阶段:菌核、菌丝、子实体,其中菌核为药用部分,本论文通过研究猪苓菌核的表达序列标签(EST),为深入研究猪苓菌核的形成机制,分析物种在基因组学上的差异提供理论依据。以采自陕西省佛坪县的三年生猪苓菌核为原材料,通过EASY spin植物快速提取试剂盒提取总RNA,经电泳检测条带清晰,OD260/280在2.0-2.1之间,产量符合反转录的要求;利用SMART法成功构建了猪苓菌核的cDNA文库,原始文库滴度为6.55×106pfu/ml,重组率为94.26%,插入片段长度均大于100bp,扩增文库滴度为1.821×1010pfu/ml,符合一个质量较好的文库标准。随机选取500个单克隆进行单方向测序,获得高质量序列共371条,平均长度为383bp;经聚类拼接后得到包含127条ESTs的共46个重叠群和244个单拷贝序列,形成了共290条单基因簇,文库的冗余度为21.83%;参照植物基因功能目录对照与nr数据库已知功能序列相似性高的序列推测其蛋白质具有的功能共分为11类,分别为蛋白质合成、疾病/防御、代谢、信号转导、能量、转运、细胞生长/分裂、转录、细胞结构、胞内途径及次生代谢。仅有160条序列获得一条或一条以上GO功能基因注释;其中被注释为细胞组分(Cellular component)的包括9种功能;被注释为生物学过程(Biological process)的包括15种功能;被注释为分子功能(Molecular function)的包括3种功能。将所得序列提交到KEGG数据库进行比对,共有116个基因获得了 Knumber,其中有98个基因被带入到通路中,涉及到的通路共153条;其中基因参与最多的通路为代谢(metabolic pathway),共有22个基因参加;根据与nr数据库中已知蛋白质序列高同源性为原则,选取10条与nt/nr数据库内已登陆基因高同源性序列,并对其高同源性基因及其编码蛋白进行分析,预测未知基因及蛋白质的功能与结构。