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目的:从分子水平探讨肾病综合征的发病机制，观察肾小球硬化人鼠蛋白尿，血生化等表现及肾组织病理改变。检测肾小球硬化模型中nephl-in，podocin，一actinin一4和泛素的表达和分布以及MG一1犯对肾病综合征的干预作用。方法:选取SD雄性大鼠40只，体重100一1309，随机分成模型组和对照组(即假手术组)。模型组30只，进行右肾切除一周后给予一次性尾静脉注射阿霉素smg/kg。对照组(A组)10只，尾静脉注射等量的生理盐水。从肾切除之日起开始计算，在第5周将模型组分为干预组和非干预组，其中干预组20只，腹腔注射MG一132，分为低浓度组(B组)和高浓度组(C组)，连续注射3天;非干预组(D组)10只，腹腔注射与MG一132等量的生理盐水，连续注射3天。所有大鼠均分笼饲养，自由摄取标准饲料和水。分别在两个时间点:第6周和第8周留取血、尿标本测定血白蛋白(ALB)、胆固醇(CHOL)、尿素氮(B日N)、肌配(Cr)，测定24h尿蛋白量。肾脏标本部分放置于10%福尔马林液，部分分离肾皮质，于一70℃保存。HE染色观察肾组织形态学变化;用R工PCR检测肾皮质nephrin、podocin、。一aetinin一4、泛素mRNA水平;western blot检测nephrin、podoein、。一actinin一4、泛素的蛋白表达;间接免疫荧光观察nephrin、podocin、a一actinin一4、泛素在肾组织的分布变化。采用SPSS17.0统计学软件进行统计学分析，结果以x士S表达，组间比较用单因素方差分析(One一way ANOVA)，两样本均数比较用t检验，多样本均数间比较采用LSD一t检验。变量间关系采用直线相关分析，凡005有统计学意义。结果:尿蛋白改变B组和C组分别与A组比较尿蛋白均有升高，差异有统计学意义（P<0.05）。B、C两组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。第8周尿蛋白的程度较第6周有加重。D组与A组比较，尿蛋白显著增多，第8周较第6周程度加重，差异有统计学意义（P<0.05）。2.血生化改变第6周，与A组相比，B组的CHOL、BUN、Cr有明显的升高，差异有统计学意义（P<0.05）；C组的ALB比A组降低，CHOL、BUN、Cr升高，分别是A组的5.17倍、2.7倍、2.48倍，差异有统计学意义（P<0.05）；D组的ALB较A组明显降低，是A组的0.43倍，CHOL、BUN、Cr升高，分别是A组的8.07倍、3.75倍、4.20倍，差异有统计学意义（P<0.05）。第8周，与A组相比，B组的BUN、Cr升高，差异有统计学意义（P<0.05）；C组的ALB比A组降低，是A组的0.60倍，CHOL、BUN、Cr升高，分别是A组的5.09倍、6.10倍、3.62倍，差异有统计学意义（P<0.05）；D组的ALB较A组明显降低，是A组的0.43倍，CHOL、BUN、Cr分别是A组的7.03倍、6.10倍、4.16倍，升高明显，差异有统计学意义（P<0.05）。3．病理改变A组第6周和第8周肾小球及肾小管结构基本正常。第6周B组和C组在部分肾小球充血肿大，肾小管上皮细胞疏松变、空泡变，肾小管灶性扩张，可见蛋白管型。D组少数大鼠肾脏中有局灶性增生，间质轻度炎症细胞浸润。第8周B组、C组、D组大鼠肾皮质足突细胞明显肥大,系膜基质增生明显,球囊壁增厚,弥漫性炎性细胞浸润,蛋白管型多见。部分D组大鼠肾小球节段硬化,球囊粘连,毛细血管袢瘤样扩张,间质中度纤维化。4．RT-PCR检测肾皮质nephrin，podocin，α-actinin-4，泛素mRNA水平nephrin mRNA：第6周，与A组比较，B组、C组、D组的nephrin mRNA水平下降至A组的0.84、0.80、0.66。第8周，与A组比较，B组、C组、D组的nephrin mRNA水平明显下降，分别是A组的0.72、0.68、0.39，差异有统计学意义（P<0.05）。四组间比较，第8周各组nephrin mRNA水平较第6周均有下降，B组、C组两间在第6周和第8周比较差异无统计学意义（P>0.05）。第8周D组的nephrin mRNA水平比第6周明显下降，差异有统计学意义（P<0.05）。podocin mRNA：第6周，与A组比较，B组、C组的podocin mRNA水平升高，分别上升了1.30倍，1.32倍，D组的podocin mRNA水平与A组相比降低，差异有统计学意义（P<0.05）；第8周，B组、C组的podocin mRNA比A组水平稍升高，差异无统计学意义（P>0.05）；D组的podocin mRNA水平有明显下降，是A组的0.57，差异有统计学意义（P<0.05）。B组、C组、D组的podocin mRNA水平在第6周和第8周比较差异无统计学意义（P>0.05）。α-actinin-4 mRNA：四组间比较，在第6周和第8周各组间α-actinin-4 mRNA无明显的上升或下降，差异无统计学意义（P>0.05）。泛素mRNA：在第6周，与A组比较，B组、C组、D组的泛素RNA水平均上升至A组的1.93倍，2.21倍，2.42倍；在第8周，与A组比较，C组、D组的泛素mRNA水平明显上升，分别是A组的1.99倍，2.03倍，所有差异均有统计学意义（P<0.05）。B组泛素mRNA与A组相比无明显升高，差异无统计学意义（P>0.05）。四组间比较，第8周C组和D组的泛素mRNA水平比第6周明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。5．Western Blot检测nephrin，podocin，α-actinin-4，泛素的蛋白表达Nephrin、podocin、α-actinin-4、泛素分子量分别为180 KDa、45 KDa、100 KDa、60 KDa；分别在100KDa、40KDa、100 KDa、40 KDa处出现清晰的条带。nephrin：与A组比较，B组、C组、D组的表达均有减弱，B组的nephrin表达在第6周和第8周分别是A组的0.74和0.62倍，差异有统计学意义（P<0.05）。C组的nephrin表达在第6周和第8周分别是A组的0.76和0.58倍，D组的表达在第6周和第8周分别为A组的0.28和0.37倍，差异有统计学意义（P<0.05）；B组和C组在第6周和第8周比较无明显差异（P>0.05）。第8周C组的nephrin表达比第6周明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。podocin：与A组比较，B组、C组、D组的表达均有减弱，D组在第6周和第8周分别为A组的0.53和0.44倍，差异有统计学意义（P<0.05）。在第6周和第8周，B组和C组的表达与A组相比明显减弱，差异有统计学意义（P<0.05）。a-actinin-4：B组、C组、D组蛋白表达量在第6周和第8周与A组相比，均无显著差异（P>0.05）。泛素：与A组比较，B组、C组、D组的表达均增强，D组在第6周和第8周分别为A组的1.70和2.36倍，差异有统计学意义（P<0.05）。第6周B组和C组泛素的表达与A组相比增强，分别是A组的1.19倍和1.22倍，差异有统计学意义（P<0.05）；第6周和第8周，B组和C组泛素表达无明显差异（P>0.05）。6．间接荧光免疫染色经染色发现nephrin、podocin、a-actinin-4免疫荧光染色表现为沿肾小球毛细血管袢连续样分布，B组、C组、D组第6周nephrin和podocin从沿肾小球毛细血管袢线样分布向不连续粗粒样的分布模式转变，第8周的表达进一步减弱，受累的肾小球进行性增多。随着病情的加重，a-actinin-4表达稍有减弱，但程度并不明显。泛素在肾小球和肾小管都有分布，呈细颗粒状分布。随着病情的加重，表达逐渐增强，染色增强区逐渐扩大，有的区域呈斑片状和连续线状增强，且第8周的染色比第6周稍有增强。7．nephrin、podocin、α-actinin-4、泛素表达与尿蛋白量之间的相关性分析Nephrin蛋白表达量与尿蛋白量呈负相关(r=-0.653，P<0.05)；podocin蛋白表达量与尿蛋白量呈负相关(r=-0.519，P<0.05)；a-actinin-4蛋白表达量与尿蛋白量无相关性((r=-0.294，P>0.05)；泛素表达量与尿蛋白量呈正相关(r=0.837，P<0.05)。结论：1.建立阿霉素肾病大鼠模型，观察到nephrin，podocin，α-actinin-4、泛素在肾小球内均有表达，泛素在肾小管-间质中也有表达。泛素在病变发展中表达增强，nephrin、podocin表达相对减弱，α-actinin-4表达无明显改变。2. MG-132是一种蛋白酶体抑制剂，阻断泛素-蛋白酶体途径后泛素表达下降，nephrin，podocin表达相应增强，肾病综合征病变改善。提示泛素-蛋白酶体途径参与了肾病综合征的发生过程。