直接肾素抑制剂阿利吉仑抑制肾间质纤维化小鼠上皮-间质转化的作用及其机制

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目的:探讨直接肾素抑制剂(direct renin inhibitor,DRI)阿利吉仑(aliskiren)对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral occlusion,UUO)导致的小鼠肾间质纤维化中上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的调节作用,同时测定阿利吉仑对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、血清应答因子(serum-response factor,SRF)以及血管紧张素受体1(angiotensinreceptor,AT1)表达程度的影响,从而阐明阿利吉仑抑制肾间质纤维化小鼠上皮-间质转化的可能作用机制。  方法:24只雄性ICR小鼠随机分为假手术组、模型组和阿利吉仑药物干预组,每组8只,适应性喂养1周后,应用单侧输尿管结扎的方法建立小鼠肾间质纤维化模型,术前1天药物干预组按25mg/(kg·d)给予阿利吉仑腹腔注射,其余两组则按等剂量于手术后每天给予生理盐水腹腔注射。3组小鼠均于术后14天处死。留取手术侧病变肾组织,HE染色观察小鼠肾组织的病理变化;Masson染色观察小鼠肾组织中胶原蛋白的表达情况;免疫组织化学染色法观察胞浆内呈棕黄色的α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况;免疫印迹法检测E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)、α-SMA、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、AngⅡ、SRF、AT1的表达情况。  结果:采用单侧输尿管结扎的方法成功制作肾间质纤维化小鼠模型,HE染色、Masson染色显示假手术组肾脏的病理改变不明显,而阿利吉仑药物干预组小鼠肾间质纤维化程度较模型组相比明显降低,胶原蛋白表达明显减少。免疫组织化学染色可见假手术组肾小管α-SMA阳性显色较少,模型组小鼠肾小管间质纤维化区域胞浆内α-SMA阳性显色明显增多,而阿利吉仑药物干预组α-SMA阳性显色较模型组相比明显减少。免疫印迹法显示模型组α-SMA、Ⅰ型胶原表达增多,分别是假手术组的1.79倍、1.95倍,E-cad表达减少,是假手术组的37.23%,差异有统计学意义(P<0.05);而给予阿利吉仑药物干预后,α-SMA蛋白、Ⅰ型胶原表达减少,E-cad表达增多,分别是模型组的63.72%、65.54%和2.1倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。同时使用免疫印迹法检测AngⅡ、AT1、SRF的表达情况,显示模型组AngⅡ、AT1、SRF呈强阳性表达,分别是是假手术组的1.56倍、1.77倍、1.67倍,差异有统计学意义(P<0.05);而阿利吉仑药物干预后,能够下调AngⅡ、AT1、SRF的表达,分别是模型组的78.84%、83.61%、73.05%,差异有统计学意义(P<0.05)。  结论:阿利吉仑能够上调E-cad蛋白的表达,同时下调α-SMA、ColⅠ蛋白的表达,从而抑制肾间质纤维化小鼠上皮-间质转化,该调控作用可能和阿利吉仑下调AngⅡ、AT1、SRF蛋白表达有关。
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