灰霉病是一类严重的植物病害,对于灰霉的防治主要依赖于化学杀菌剂。由于不合理的施药方法,导致灰霉对多种常规杀菌剂产生了抗药性。因此急需一种对于田间抗药菌株进行高通量,多抗药相关位点检测的方法。而本实验室前期初步建立了悬浮芯片技术,能够检测4个抗药相关基因的8种基因型,有些常见位点不能检测。本研究增加悬浮芯片法的检测位点数量并对方法进行优化,并且应用悬浮芯片技术检测河北省地区的田间菌株,对指导田间施药有重要的意义。本研究的主要结果如下:（1）灰霉耐药基因位点悬浮芯片法优化。在本课题前期建立的检测4个抗药相关基因的8种基因型方法的基础上,本研究通过TAG-ASPE引物的筛选,反应条件的优化,成功的在悬浮芯片法中添加了10种新的基因型,使得可测的基因型增至18种,即:Ben A-E198（GAG）、Ben A-E198A（GCG）、Ben A-E198V（GTG）、Ben A-E198K（AAG）、Ben A-F200（TTC）、Ben A-F200Y（TAC）、Sdh B-H272（CAC）、Sdh B-H272R（TCG）、Sdh B-H272Y（TAC）、Bc OS1-I365（ATC）、Bc OS1-I365N（AAC）、Bc OS1-I365S（AGC）、Bc OS1-Q369（CAG）、Bc OS1-Q369P（CCG）、Bc OS1-N373（AAC）、Bc OS1-N373S（AGC）、erg27-F412（TTC）、erg27-F412S（TCC）。经过优化的悬浮芯片法能较全面的涵盖常用杀菌剂抗性相关的基因型,能为田间灰霉病菌的多重抗性快速监测提供技术平台。（2）灰霉耐药基因位点悬浮芯片法应用河北省地区的田间菌株的检测。通过悬浮芯片法对2016至2017年间河北省地区103株菌株进行了检测,结果显示Ben A、Sdh B、Bc OS1、erg27基因的抗性频率分别为100%、4.85%、75.73%、0%。高达98.06%的菌株具有多重抗药性,其中具有双重、三重、四重抗性的菌株频率分别为13.59%、83.50%、0.97%,且具有三重抗性的type X（Car^RDie^RBos^SIpr^RFen^S）菌株数量最多。这说明河北省地区多重抗性情况已比较严重。（3）灰霉耐药基因位点悬浮芯片法与菌丝生长速率法的比较。为了更合理的指导田间施药,除分子法外,本文还结合了菌丝生长速率法来测试菌株的敏感性。携带着Ben A-E198A/K/V突变的菌株对多菌灵是高抗,而一株Ben A-F200Y突变菌株则是中抗。Ben A-E198K突变对乙霉威具有十分高的抗性,Ben A-E198V突变对乙霉威具有中抗和高抗。H272R菌株对啶酰菌胺是低抗。所有异菌脲抗性的菌株均为低抗和中抗。此外,通过比较2016年间至2017年间不同基因型菌株抗药水平的变化发现,在持续用药的情况下,菌株对相应药物的EC₅₀值会有显著的上升,如Ben A-E198K/V、Bc OS1-I365S和Bc OS1-Q369P+N373S。因此,在该地区不推荐使用多菌灵,且乙霉威、异菌脲和啶酰菌胺的使用需要更加慎重。由于分子法结果中未测到erg27基因的抗性突变,环酰菌胺抑制灰霉病可以作为该地区的一种选择。综上所述,本研究建立了更高通量灰霉耐药基因位点悬浮芯片法检测技术,可以同时对4个抗药相关基因的18种基因型进行分析。该方法为指导田间用药和监测耐药性突变提供了技术支撑。