一、研究背景随着全球人口老龄化趋势以及人群生活方式、环境等的改变，心血管疾病发病率日趋增加，心血管疾病已经成为危害人类健康的主要疾病之一，明确心血管疾病的发生发展机制对其防治具有重要意义。血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）异常增殖是心血管疾病关键性病理生理机制之一。正常状态下，VSMCs存在于血管壁中膜，在动脉粥样硬化（Atherosclerosis, AS）等疾病状态下，VSMCs能够从中膜迁移至内膜，并出现异常增殖，导致血管内膜的增厚与管腔狭窄。然而，VSMCs增殖的机制尚未完全阐明，深入研究VSMCs的增殖机制，并以此寻找潜在的治疗靶点，具有重要的临床意义。近年来研究显示炎症与心血管疾病密切相关。心血管疾病被认为是一种慢性低级别炎症或称亚临床炎症状态，炎症在心血管疾病的发生、发展以及进一步造成靶器官损害的过程中起着重要的作用。单核/巨噬细胞是炎症介质的主要来源细胞，既往研究表明单核/巨噬细胞参与VSMCs增殖。机体受到炎症刺激后，激活血液中的单核/巨噬细胞，生成并释放多种细胞毒素，导致血管内皮损伤，内皮基质暴露，继而诱导血小板的粘附、聚集。活化的血小板释放多种的细胞因子、生长因子（如：转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）、血小板衍生生长因子(Platelet derived growthfactor，PDGF)等），启动VSMCs增殖并参与心血管疾病发生发展。而其后有研究发现，败血症家兔在内皮细胞受损、血小板粘附前，中膜平滑肌细胞已开始向内膜增殖、迁移，单核/巨噬细胞是否除了通过分泌细胞因子、生长因子等方式作用于VSMCs外，还存在其他作用方式？微泡（Extracellular vesicles，EVs）是近年来日益受到研究者们重视的一种细胞间通讯介质。EVs由磷脂双分子层包裹而成，表面携带母体细胞来源的的抗原、脂质等，其内含有多种母体细胞成分，包括细胞膜受体、骨架蛋白、信号分子等蛋白质，胆固醇、鞘磷脂等脂类以及DNA、mRNA、miRNA等核酸成分，可以介导细胞间通讯并调节受体细胞的生物学功能，在细胞间相互作用及信号传递中发挥重要作用。在正常状态下机体中EVs含量相对稳定，在某些病理条件下，EVs分泌可以显著增加。严重的高血压患者中，内皮细胞以及单核来源的EVs均明显升高，且EVs含量与血压呈明显正相关。在动脉粥样硬化大鼠模型血管壁中EVs含量增加，同时伴有大血管炎症、氧化应激与微血管内皮功能受损。单核细胞是机体EVs的重要来源细胞之一，单核细胞是否可以通过其分泌的EVs参与VSMCs异常增殖这一心血管疾病重要的病理生理机制目前尚不明确。我们推测：单核细胞可能通过分泌EVs作用于VSMCs，引起VSMCs异常增殖，进而参与心血管疾病的发生发展过程。本研究将人主动脉VSMCs（humanaortic VSMCs，HA-VSMCs）与单核细胞来源的EVs共培养，观察EVs对VSMCs增殖的影响并进一步探讨其具体作用机制，为寻找干预心血管疾病的有效靶点提供新的的理论基础。二、研究目的明确单核细胞分泌的EVs对人血管平滑肌细胞增殖的影响，并进一步探寻其机制。三、研究方法1.人主动脉平滑肌细胞（Human Aortic Smooth Muscle Cells，HA-VSMCs细胞）、人单核细胞（Humanacute monocytic leukemia cell line，THP-1）的培养；2.根据以往文献报道[1][2]，采用多步差速离心法提取EVs；3.透射电镜对EVs的形态学进行鉴定，流式细胞术对EVs的数量进行比对[3]，免疫印迹的方法对EVs的标志性蛋白进行鉴定；4.将单核细胞给予脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）处理后提取EVs，以模拟体内炎症状态，使单核细胞充分活化；5.采用单核细胞EVs及LPS刺激单核细胞后提取的EVs（LPS-EVs）与VSMCs细胞共培养，用细胞计数、[3H]-TdR和CCK-8方法，了解VSMCs增殖的情况；6.免疫印迹的方法检测丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated proteinkinases,MAPKs）信号通路磷酸化以及c-jun与c-fos的表达，观察单核EVs是否通过此通路对VSMCs增殖产生影响。四、研究结果1.单核细胞EVs可以促进VSMCs增殖，且呈浓度及时间依赖性，经LPS刺激后的单核细胞EVs促VSMCs增殖较非刺激组EVs明显。2.单核细胞EVs可诱导VSMCs中ERK、JNK与P38磷酸化，上调c-fos与c-jun的表达，从而通过MAPKs信号通路影响VSMCs增殖。五、结论单核细胞EVs可以促进VSMCs的增殖；经LPS活化后的单核细胞所分泌的EVs促VSMCs增殖的作用更为明显；EVs促VSMCs增殖的作用可能是通过活化MAPKs信号通路实现的。