三种水生生物活性肽的制备分离与促免疫活性研究

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我国水域的辽阔,气候环境的多样,使得我国水生生物资源十分丰富,高附加值利用这些资源、开发水生生物资源精深加工工艺,有利于国家经济的发展和生态保护[1]。同时,水生生物蕴含许多营养成分和生物活性物质,可开发成保健食品或药品,具有广泛的市场前景。本文分别以食品加工过程产生的下脚料罗非鱼鱼鳞、海参内脏、鳗鱼鱼骨,制备分离得到罗非鱼肽、海参肽、鳗鱼肽,并研究三种生物活性肽对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫激活活性,及其作用机制。本文研究结果如下:(1)改进了罗非鱼肽的制备工艺,将酸碱水洗的步骤进行优化、改变酶解的条件、增加层叠过滤与精密过滤步骤,使罗非鱼肽的制备成本降低,产率和质量提升。研究罗非鱼肽的免疫活性发现,罗非鱼肽可诱导RAW264.7细胞产生一氧化氮(NO),具有剂量依赖性,并诱导一氧化氮合酶(iNOS)的表达,且无细胞毒性作用,这些证明罗非鱼肽具有良好的免疫增强活性。(2)通过酶解海参内脏制备海参肽,并对其分子量分布、氨基酸组成、N端结构、毒性及纯度进行测定。对海参肽免疫活性的研究发现,海参肽可增加RAW264.7细胞免疫活性,且无细胞毒性作用。进一步研究发现,海参肽通过激活NF-κB信号通路与MAPK信号通路,促进TNF-α、IL-6分泌,从而发挥促免疫活性。(3)通过酶解鳗鱼鱼骨制备鳗鱼肽,并发现鳗鱼肽具有诱导RAW264.7细胞产生NO,激活NF-κB信号通路与MAPK信号通路,促进TNF-α,IL-6分泌的功能,具有促免疫活性,进一步通过离子交换层析和凝胶过滤层析分离,最终得到促免疫活性最强的鳗鱼肽Fr-1-1组分。
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