生长激素,是由脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的一类单链多肽类激素,它是一种具有广泛生理功能的生长调节素。能影响几乎所有的组织和细胞,其主要作用是刺激骨、软骨细胞的生长和分化,调节蛋白质、糖及脂肪的代谢。与动物生长发育、繁殖等密切相关,目前成为在提高动物生长速度、生长性能等方面研究的热点之一。本研究将牛生长激素基因功能区的基因片段构建到真核表达载体pEGFP-N1,对重组质粒pEGFP-N1-BGH进行脂质体包埋,采用胚盘显微注射法制备转基因鸡,为培育具有生长速度快、适应能力强等特性以及产业化前景广的转基因鸡打下基础。研究结果如下:本研究运用分子生物学技术,提取犊牛脑垂体总RNA,利用设计的一对特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出BGH基因功能区片段,通过DNA重组技术将该基因片段定向克隆到pEGFP-N1真核表达载体CMV启动子下游,构建pEGFP-N1-BGH表达载体。通过PCR扩增、酶切和测序的方法对重组DNA进行鉴定。结果显示:应用RT-PCR克隆的BGH功能区片段,长度为654bp;成功构建了pEGFP-N1-BGH真核表达载体。且BGH基因和EGFP基因读码框一致。鸡蛋开窗法是鸡胚盘显微注射法的关键技术之一,为此本研究对未转染外源基因的种蛋开口后进行了4种不同的封口方法对孵化率的影响试验。设置四个试验组:①蛋壳膜+封口胶,②蛋壳膜+蛋壳,③蛋壳膜+石蜡,④蛋壳膜。同时把未经任何处理的种蛋设置为对照组。结果表明:4个实验组的鸡胚的孵化率分别为10%,18%,8%,2%。而对照组孵化率为83.3%。蛋壳膜+蛋壳的封口方法处理的孵化率相对最高。采用胚盘纤维注射法进行转染试验,一次注射受精卵200枚,孵出小鸡21只,孵化率为10.5%,对孵化后死亡的5~7胚龄的全胚和7胚龄后的鸡胚的心、肝、脾、肺、肾、脑、皮肤以及活鸡的血液、皮肤进行检测。荧光检测结果显示:荧光检测阳性率为3.3%(5/121),PCR检测结果显示:PCR检测结果阳性率为2.47%(3/121)。试验结果表明:外源基因通过脂质体的包埋,采用胚盘纤维注射法可获得转基因鸡,胚盘显微注射法是制备转基因鸡的一条有效途径。