论文部分内容阅读
目的:炎症已经被认为是癌症的第七种生物学特性。很多肺部慢性炎症也能够增加肺癌发生的风险,并在一定程度上促进肺癌的进展。脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)是革兰氏阴性杆菌释放的重要致炎因子,具有引起炎性免疫应答及内毒素休克等效应。一些既往研究显示,Hippo信号通路参与了肺癌细胞的增殖。本研究拟探究Hippo信号通路在LPS诱导的肺腺癌A549细胞增殖过程中的作用及其机制。方法:1、培养A549细胞株,应用CCK-8检测LPS对A549增殖能力的影响;2、应用Western blot(WB)分别检测不同浓度LPS处理A549后Hippo信号通路相关蛋白(Mst1、SAV1、LATS1、MOB1、P-MOB1、YAP 和 P-YAP(ser127))的表达变化;应用WB分别检测LPS处理不同时间点A549中Hippo信号通路相关蛋白(Mst1、YAP、P-YAP(ser127))的表达变化;应用免疫荧光检测LPS处理后A549中YAP蛋白的定位变化;3、A549转染Cy3标记的siRNA,应用免疫荧光显微镜观察转染效率;应用WB、逆转录-多聚酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测目的蛋白和mRNA的抑制率;4、A549转染 Mst1 siRNA、YAPsiRNA 后,抑制 Mst1、YAP 表达,并应用 CCK-8检测LPS对转染Mst1 siRNA、YAP siRNA后A549增殖能力的变化;5、A549转染Mst1siRNA、YAPsiRNA后,抑制 Mst1、YAP表达,应用 WB检测Mst1、YAP的表达变化;应用免疫荧光技术检测YAP蛋白定位变化。结果:1、0.1 μg/ml的LPS可显著促进A549细胞增殖;2、LPS能够下调A549细胞中Mst1、LATS1和p-mob1总蛋白的表达,上调SAV1、Mob1、YAP和p-YAP总蛋白的表达以及促进YAP的核易位;LPS对肺癌A549细胞中YAP蛋白的定位无明显影响;3、Mst1 siRNA和YAP siRNA能够成功转染至肺癌A549细胞中,并且显著抑制了A549细胞中Mst1和YAP的表达;4、转染Mst1 siRNA后LPS对A549细胞的增殖作用无明显变化,而转染YAP siRNA后LPS对A549细胞的促增殖作用明显抑制;5、转染Mst1 siRNA后,LPS能够进一步减少A549中Mst1的表达,并且显著增加YAP的表达;转染YAP siRNA后,LPS对A549中Mst1的表达无明显影响,而对YAP表达的促进作用明显减弱。6、转染Mst1 siRNA和YAP siRNA后,LPS对于A549细胞中YAP的表达定位无明显影响。结论:1、低浓度LPS能够通过上调YAP表达促进A549细胞的增殖;2、YAP并不完全通过Hippo信号通路参与LPS诱导的A549细胞的增殖。