姜黄挥发油对人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞增殖凋亡的影响及其机制初步研究

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目的近年研究报道显示,姜黄挥发油对多种肿瘤细胞具有抑制作用,能显著减少肿瘤数目,缩小瘤体体积,其主要作用于肿瘤早期,还能预防肿瘤形成。本文研究姜黄挥发油(turmeric volatile oil,TVO)对人表皮黑色素瘤A375(以下简称A375)细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法不同浓度TVO在体外对A375细胞的作用。细胞增殖-毒性检测(CCK8)法测不同浓度TVO(0~160mg/L)在不同时间段(24h、48h、72h)对A375细胞的增殖抑制率;根据CCK8结果选取有效最低药物浓度进行实验:吉姆萨染色,倒置显微镜观察细胞凋亡形态;DNA片段化检测细胞凋亡;流式细胞术测细胞凋亡率;Western blot检测Caspase-3及BIRC7蛋白表达。结果随TVO浓度的增加对A375细胞生长具有显著的抑制增殖作用,CCK-8结果示浓度为(0、2.5、5、10、20、40、80、160mg/L)TVO,24h抑制率分别为(0、2.5、5、10、20、40、80、160mg/L)TVO,24h抑制率分别为(0.00±0.00、0.015±0.02、0.084±0.02、0.087±0.01、0.096±0、0.087±0.01、0.122±0.03、0.209±0.01);48h(0.00±0.00、0.005±0.00、0.139±0.02、0.160±0.01、0.217±0.03、0.225±0.02、0.246±0.01、0.355±0.01);72h(0.00±0.00、0.323±0.00、0.446±0.01、0.470±0.02、0.479±0.02、0.352±0.01、0.385±0.02、0.441±0.01),与0mg/L相比P<0.05;TVO诱导A375细胞凋亡,药物诱导后细胞增殖变慢,贴壁性降低,形态变得不规则,见核固缩、核碎裂及核溶解,提取DNA凝胶电泳药物作48h后,可见凋亡典型的DNA梯状条带,并随药物浓度增加越明显细胞核碎裂;流式测细胞凋亡率,浓度为0、2.5、5、10mg/L的TVO,A375凋亡率分别为0、12.7、13.6、15.4%,死亡率仅为0.1%;Western blot测浓度为(0、2.5、5、10mg/L)TVO作用48h后,随药物浓度增高,凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-1、TNR-α的表达量逐渐增多,凋亡抑制相关蛋白BIRC7、TAK1、JNK1、TAB1表达量逐渐减少,与0mg/L相比P<0.05。结论TVO对人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞有抑制增殖作用,同时有促其凋亡作用,具有抗肿瘤细胞功效。其机制之一是通过下调细胞凋亡抑制蛋白BIRC7表达,激活细胞凋亡途径关键酶Caspase-3,进而抑制肿瘤细胞分化、增殖与促进凋亡。
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