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研究目的:我们已经研究发现羊膜间充质干细胞(Human amniotic mesenchymal stem cells,HAMSCs)能促进骨髓间充质干细胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,HBMSCs)增殖、成骨及血管新生,而脂肪间充质干细胞(Human adipose-derived stem cells,HASCs)也有增殖、成骨、血管分化的能力,而HASCs比HBMSCs易获取、量更丰富且分布较广,所以本实验主要研究HAMSCs促进HASCs成骨及血管新生的作用及相关机制,为组织工程骨提供新的种子细胞,并为组织工程骨再生提供理论及实验依据。研究方法:通过收集自愿捐献的人胎盘上的羊膜层,分离、获取HAMSCs,用流式细胞术进行干细胞表面标记物初步鉴定后,选取3-6代细胞用于实验。选取单独的HAMSCs和HASCs为对照组,用Transwell小室构建HAMSCs和HASCs非接触式共培养体系;通过流式细胞术检测细胞周期来观察HAMSCs对HASCs增殖方面的作用;通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定、茜素红染色及QPCR的方法检测HAMSCs对HASCs在成骨相关指标上的作用;通过蛋白印迹法(Western blot)检测HAMSCs促进HASCs成骨分化的潜在机制;加入Erk1/2 MAPK通路特异性抑制剂(U0126),通过Western blot,QPCR,ALP活性测定及茜素红染色反向验证HAMSCs促进HASCs成骨分化的潜在机制;通过Elisa法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平,再用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)进行成管试验,加上QPCR这三种方法检测HAMSCs对HASCs在促进血管新生上的相关作用;加入Erk1/2 MAPK通路特异性抑制剂(U0126),通过VEGF水平的检测和HUVECs成管试验反向验证HAMSCs促进HASCs血管新生的作用及其可能潜在机制。实验结果:所分离提取的HAMSC为贴壁生长的成纤维样细胞,通过流式细胞术进行细胞表面标记物鉴定,证明其为间充质细胞。另外我们发现以下两点:第一,在非接触共培养体系中,HAMSCs对HASCs不仅有促进增殖的作用,还有促进其成骨分化的作用,且其机制与HASCs中的Erk1/2 MAPK通路被HAMSCs激活相关;第二,在非接触共培养体系中,HAMSCs对HASCs有促进其血管新生的作用,且其机制也与HASCs中的Erk1/2 MAPK通路被HAMSCs激活可能相关。结论:成功提取HAMSCs,通过实验从正反面、成骨及成血管两方面证明HAMSCs有促进HASCs增殖、成骨和血管新生的作用及优势,并分析证实了相关机制,表明HAMSCs可以作为一种骨组织工程中较为理想的种子细胞。