论文部分内容阅读
本文通过建立亚急性衰老动物模型,探究金雀异黄素（Genistein,GEN）对亚急性衰老小鼠模型中抗缪勒管激素（Anti-mullerian hormone,AMH）和卵泡刺激素受体（Follicle stimulating hormone receptor,FSHR）的表达。选取2.5月龄的雌性昆明小鼠（30±2 g）72只,按照体重随机分成空白对照组（CG）、模型组（MG）、GEN低（L）、中（M）、高剂量组（H）及戊酸雌二醇对照组（EG）,共6组。除空白组外,其他组腹腔注射200 mg/kg的D-半乳糖生理盐水制备亚急性衰老小鼠模型,造模成功后,GEN低中高剂量组分别给予10、20、40 mg/kg的GEN灌胃,阳性对照组以0.5 mg/kg的戊酸雌二醇灌胃,空白组用等量花生油灌胃,灌胃周期为15 d。试验期间称取小鼠体重,解剖后对重要脏器进行称重;观察小鼠动情周期、卵巢形态并进行卵泡计数;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中AMH、雌二醇（Estradiol,E2）、卵泡刺激素（Follicle stimulating hormone,FSH）、黄体生成素（Luteninizing hormone,LH）、孕酮（Progesterone,P）、基质细胞衍生因子-1（SDF-1/CXCL12）的浓度;荧光定量PCR（RTFQ-PCR）技术检测小鼠卵巢组织中AMH及其Ⅱ型受体（Anti-mullerian hormone receptor typeⅡ,AMHRⅡ）、FSHR、LH及其受体（Luteninizing hormone receptor,LHCGR）、SDF-1及其受体（Chemokine receptor 4,CXCR4）的基因水平;蛋白印迹技术（Western blot,WB）检测小鼠卵巢内AMH及AMHRⅡ、FSH及FSHR、LH及LHCGR、CXCL12及CXCR4的蛋白水平。试验结果:（1）GEN剂量组的卵巢要大于模型组,且GEN高剂量组（40 mg/kg）的卵巢长径长于模型组,差异显著（p<0.05）;（2）GEN各剂量组的窦状卵泡数量要低于模型组,差异极显著(（p<0.01）;造模组小鼠的动情期紊乱,动情周期较正常组小鼠延长,差异显著（p<0.05）;（3）造模结束后,造模组体重较空白组下降,差异显著或极显著（p<0.05,p<0.01）;灌胃开始后,模型组小鼠体重与GEN各剂量组无显著差异;GEN各剂量组与模型组的卵巢/体重和子宫/体重无显著差异;（4）造模组小鼠血清AMH浓度较空白组降低,差异显著或极显著（p<0.05,p<0.01）,灌胃后GEN低高剂量组均高于模型组,且差异显著（p<0.05）;造模组小鼠血清FSH和LH浓度较空白组降低,差异显著或极显著（p<0.05,p<0.01）,灌胃后GEN各剂量组FSH和LH浓度均较模型组降低,差异显著或极显著（p<0.05,p<0.01）;造模组小鼠血清E2、P和CXCL12浓度均较空白组降低,差异显著或极显著（p<0.05,p<0.01）,灌胃后GEN各剂量组均较模型组升高,且差异显著或极显著（p<0.05,p<0.01）;（5）GEN中剂量下,AMH和LH mRNA的表达量均较模型组组高,差异显著（p<0.05）,GEN中剂量组AMHRⅡ和LHCGR mRNA的表达量均较其他剂量组高,但低于模型组;随着GEN浓度的增加,FSHR mRNA的表达量也呈上升趋势,其中GEN高剂量组的表达量要高于模型组;GEN高剂量下CXCL12 mRNA的表达量最高,且与模型组比较差异显著（p<0.05）,CXCR4 mRNA的表达量随着GEN剂量的增大也逐渐升高,其中GEN高剂量下表达量最高;（6）小鼠卵巢内AMH、AMHRⅡ蛋白与LH、LHCGR蛋白的表达量都随GEN剂量的增加而升高,与模型组比较差异极显著（p<0.01）,其中在GEN高剂量下表达量最高,与雌激素对照组表达量近似;FSH、FSHR蛋白与CXCL12、CXCR4蛋白的表达量也随GEN浓度的提高而提升,与模型组比较差异极显著（p<0.01）,其中GEN高剂量组的表达量也最高,且蛋白表达量高于雌激素对照组。结论:GEN对于血清中内分泌相关激素水平有很好的调节作用,同时能改善卵巢相关因子AMH、FSHR等的mRNA及蛋白表达水平。GEN通过调节AMH、FSHR等卵巢相关因子的水平,进而起到调节卵巢生长发育的作用,最终达到改善卵巢功能的目的。