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目的探讨华蟾酥毒基抑制食管癌Kyse-520细胞侵袭和迁移的相关机制是否与局部黏着斑激酶/磷脂酰肌醇3-激酶/Akt信号通路有关。方法1、将常规培养的食管癌Kyse-520细胞随机分为2组,对照组（0.1%DMSO）和实验组(0.025、0.1、0.4、1.6、6.4μmol·L-1华蟾酥毒基),培养12、24、48 h,利用CCK-8法检测华蟾酥毒基对Kyse-520细胞增殖活性的影响;2、将常规培养的食管癌Kyse-520细胞随机分为2组,对照组（0.1%DMSO）和实验组(25、50、100 nmol·L-1华蟾酥毒基),置于实时细胞记录仪监测培养48 h,采用划痕愈合实验检测华蟾酥毒基对Kyse-520细胞“二维”迁移能力的影响;3、将常规培养的食管癌Kyse-520细胞随机分为2组,对照组（0.1%DMSO）和实验组(25、50、100 nmol·L-1华蟾酥毒基),培养24 h,通过Transwell小室法检测华蟾酥毒基对Kyse-520细胞“三维”迁移能力和侵袭能力的影响;4、将常规培养的食管癌Kyse-520细胞随机分为2组,对照组（0.1%DMSO）和实验组(25、50、100 nmol·L-1华蟾酥毒基),培养24 h,通过实时荧光定量PCR分析各组Kyse-520细胞中局部黏着斑激酶、Akt、人第10号染色体缺失的磷酸酶、血管内皮生长因子A、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9 mRNA的表达;5、将常规培养的食管癌Kyse-520细胞随机分为2组,对照组（0.1%DMSO）和实验组(25、50、100 nmol·L-1华蟾酥毒基),培养24 h,通过免疫印迹实验检测各组Kyse-520细胞中局部黏着斑激酶、磷酸化局部黏着斑激酶（Try397）、Akt、磷酸化Akt（Ser473）、人第10号染色体缺失的磷酸酶、血管内皮生长因子A、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9蛋白表达水平。结果1、CCK-8结果显示,华蟾酥毒基以时间和浓度依赖的方式抑制食管癌细胞的增殖活性（P<0.05）,即华蟾酥毒基浓度越高,处理时间越长,细胞活性越低;2、划痕愈合实验结果表明,无论是6 h还是48 h,各浓度华蟾酥毒基均能明显缩小划痕愈合面积（P<0.01）,且随着时间的延长和药物浓度的增加,“伤口”逐渐增大,提示华蟾酥毒基抑制食管癌细胞的“二维”平面迁移,且该效应呈浓度和时间依赖性;3、Transwell迁移实验结果显示,随着药物浓度的增加,Kyse-520细胞穿膜细胞数明显减少（P<0.05,P<0.01）,提示华蟾酥毒基可明显抑制食管癌细胞的“三维”平面迁移,且存在明显的量效关系;4、Transwell侵袭实验结果显示,经25、50、100 nmol·L-1的华蟾酥毒基处理24 h后,Kyse-520的穿膜细胞数与对照组相比明显减少（P<0.05,P<0.01）,且呈浓度依赖的方式,提示华蟾酥毒基可明显抑制食管癌细胞的侵袭能力。5、实时荧光定量PCR结果显示,当华蟾酥毒基的浓度为50、100 nmol·L-1时,血管内皮生长因子A、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9 mRNA表达明显下调（P<0.05,P<0.01）,人第10号染色体缺失的磷酸酶mRNA表达明显上调（P<0.01）,与对照组相比差异有显著性,且呈一定的浓度依赖性,而局部黏着斑激酶、Akt mRNA表达改变不明显。6、免疫印迹实验结果显示,当华蟾酥毒基的浓度为50、100 nmol·L-1时,与对照组相比,血管内皮生长因子A、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9、磷酸化局部黏着斑激酶（Try397）、磷酸化Akt（Ser473）蛋白表达明显减少（P<0.05,P<0.01）,人第10号染色体缺失的磷酸酶蛋白表达明显上升（P<0.05）,局部黏着斑激酶和Akt总蛋白表达无明显变化。结论1、华蟾酥毒基能显著抑制食管癌Kyse-520细胞增殖,并呈现时间浓度依赖性;2、华蟾酥毒基通过诱导PTEN表达,负调控局部黏着斑激酶/磷脂酰肌醇3-激酶/Akt信号通路,下调血管内皮生长因子A、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的表达,进而抑制食管癌Kyse-520细胞的侵袭和迁移。