论文部分内容阅读
研究背景：慢性病贫血(ACD)，常见于慢性感染、肿瘤及风湿免疫疾病，对患者的生活质量与预后可造成严重影响。ACD发生的机制为肠道铁吸收障碍和网状内皮系统铁扣留，新发现的小分子肽hepcidin被证实在这一过程中起核心作用。Hepcidin是一种急性期蛋白，在肝细胞中合成，通过内化降解小肠上皮基底面和巨噬细胞表面的铁转运受体FN1，干扰了铁从肠道的吸收和从巨噬细胞的释放。IL-6等细胞因子在体内和体外实验促进其合成方面有重要作用，被认为是ACD的关键介导物。实验证实外源性EPO能降低正常小鼠与ACD小鼠肝脏的HepcidinmRNA水平，改善ACD程度。但是EPO是否能改变人肝细胞HepcidinmRNA表达尚未被阐明。
研究目的：
1.通过不同培养条件下人原代肝细胞培养，模拟体内ACD状态，观察Hepcidin表达的变化。
2.探索EPO对原代肝细胞及肝细胞株的Hepcidin表达影响，探讨rhEPO在ACD治疗方面的可能机制。
研究方法：
1.建立新鲜离体人原代肝细胞的培养条件，并进行HepG2人肝肿瘤细胞系细胞的培养。
2.人原代肝细胞与HepG2人肝癌细胞培养液中加入不同浓度的rhIL-6、rhEPO、rhIL-6+rhEPO，作用不同时间。
3.提取mRNA，RT-PCR后进行紫外荧光显像，以Hepcidin与G3PDH的mRNA比值进行半定量分析：比较不同条件下，人原代肝细胞及肝肿瘤细胞HepcidinmRNA的表达情况。
研究结果：
1.重组人IL-6能刺激HepG2细胞HepcidinmRNA表达升高，并随时间变化，24小时达峰值。重组人EPO对IL-6刺激HepcidinmRNA表达有一定的抑制作用。单纯rhEPO作用于HepG2细胞，Hepcidin表达基本无变化。
2.随rhIL-6剂量的增加，HepcidinmRNA表达逐渐上升。rhIL-6的浓度20ng/ml时最高，在此后升高趋势不明显。
3.rhIL-6剂量一定的情况下，给予不同剂量的rhEPO，可以观察到EPO对Hepcidin表达升高的抑制作用。培养液中rhEPO浓度达到0.5-2.0U/ml时，抑制效果最为显著，而EPO浓度进一步升高到4-8U/ml，Hepcidin表达未见进一步抑制。
4.重组人IL-6能使人原代肝细胞HepcidinmRNA表达明显增加，rhEPO对rhIL-6刺激Hepcidin表达有抑制作用。
结论：
1.重组人IL-6能刺激HepG2细胞HepcidinmRNA表达升高，并在一定范围内呈时间、剂量依赖效应，rhEPO对这一作用有抑制作用。
2.重组人IL-6能诱导新鲜离体培养的人原代肝细胞HepcidinmRNA表达明显升高，rhEPO能抑制这一作用。