FOXO1在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义和机制研究

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目的探讨FOXO1在人上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义和可能的作用机制。方法收集2016年1月至2021年12月锦州医科大学附属第一医院妇产科卵巢手术切除标本141例。其中恶性卵巢上皮性肿瘤57例(浆液性癌43例,黏液性癌14例);卵巢交界性肿瘤组织26例,卵巢良性肿瘤组织28例,卵巢正常组织30例。纳入标准:所有患者病例资料完整;术前未行放、化疗等抗肿瘤治疗;均为首次诊断出卵巢癌,均经病理组织学确诊;无合并或继发第二癌;获得患者知情同意。排除标准:存在严重心脑血管、肝肾疾病,无法耐受手术治疗患者;术前放、化疗患者;存在精神疾病;合并其他系统恶性肿瘤。根据年龄、类型、FIGO分期、分化程度以及有无淋巴结转移分组。以上临床资料完整,标本均经过医院病理科确诊。采用免疫组化法检测上述卵巢组织中FOXO1蛋白表达情况。体外培养正常人卵巢上皮细胞IOSE80、人上皮性卵巢癌细胞A2780和SKOV3。Western blot检测三种细胞FOXO1的表达水平,选择高表达FOXO1的SKOV3细胞转染siRNA FOXO1。实验分为空白组、对照组和siRNA-FOXO1组。qPCR和Western blot分别检测FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平,确定干扰效率。划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力;Western blot检测各组细胞EMT相关蛋白(E-cadherin,N-cadherin、Vimentin)、自噬蛋白(LC3、p62)以及AKT表达水平。结果1.免疫组化结果显示:FOXO1蛋白在正常卵巢组、良性肿瘤组、交界性肿瘤组和恶性卵巢癌组中阳性表达率分别为16.7%(5/30)、42.9%(12/28)、46.2%(12/26)、71.9%(41/57),四组间差异具有统计学意义(P<0.05)。恶性卵巢癌组FOXO1蛋白表达与肿瘤的分级、淋巴结转移有关。低分化和淋巴结转移患者,FOXO1蛋白表达明显增强(P<0.05),但与其它临床病理特征没有显著相关性。2.与正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌A2780细胞相比,卵巢癌SKOV3细胞FOXO1蛋白表达水平最高(P<0.01)。qPCR和Western blot结果显示:与对照组相比,siRNA FOXO1可明显抑制SKOV3细胞FOXO1表达,mRNA和蛋白水平明显下降(P<0.01)。3.划痕实验结果显示:与对照组相比,siRNA-FOXO1组SKOV3细胞的迁移率明显降低(P<0.05)。4.Transwell实验结果显示:与对照组相比,siRNA-FOXO1组SKOV3细胞的穿膜细胞数显著减少(P<0.05)5.Western blot结果显示:与对照组相比,siRNA-FOXO1组SKOV3细胞EMT抑制(E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达水平减少);细胞自噬增加(LC3Ⅱ/Ⅰ比例增加,p62蛋白表达减少);total-AKT表达不变,p-AKT表达减少(P<0.01)。结论上皮性卵巢癌组织高表达FOXO1蛋白,与肿瘤分化程度和淋巴结转移有关。其机制可能与FOXO1经AKT信号通路促进卵巢癌发生EMT和抑制肿瘤细胞自噬有关。
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