论文部分内容阅读
目的:建立T2DM大鼠骨折牵引成骨的动物模型,并探讨PPARγ以及AP2在T2DM大鼠骨折后成骨过程中的变化及其与T2DM骨折愈合障碍之间的关系。方法:将20只8周龄清洁级的健康雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组两组,每组各10只大鼠,实验组予以特制高糖高脂饲料喂养,对照组予以标准大鼠饲料喂养。喂养8周后,实验组大鼠均一次性腹腔注射STZ溶液(35mg/kg),而对照组大鼠均予以等量枸橼酸盐缓冲液腹腔注射。再喂养2周后,选取空腹血糖高于16.7mmol/L的SD大鼠继续进行后续实验,两组大鼠一同建立左侧胫骨骨折牵引成骨的动物模型。胫骨骨折术后第1天即开始延长左侧胫骨,持续至第14天,0.3mm/天,2次/天的方法持续延长左侧胫骨,术后第15天停止延长,并腹腔注射致死剂量麻醉药物处死大鼠,无菌条件下收集血液标本及左侧胫骨标本,迅速行左侧胫骨X线摄片检查。分别检测实验第8、10周及12周既处死动物时收集的血清中的总胆固醇、甘油三酯、胰岛素及血糖。将收集好的左侧胫骨标本做HE切片染色并分析骨痂内新骨的形成面积以及骨髓腔内单位面积脂肪细胞的数量、蛋白质印迹(Western blot)以及实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR Detecting System, QPCR)检查。结果:检测发现第8周时实验组大鼠与对照组相比血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、空腹胰岛素(FINs)明显升高(P<0.01),空腹血糖(FBG)则无明显差异(P>0.05)。第10周后及第12周后,实验组与对照组相比血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和空腹血糖(FBG)明显升高(P<0.01),而空腹胰岛素(FINs)则无明显差异(P>0.05)。骨组织切片HE染色、图像分析表明:实验组与对照组相比微骨柱(MCF)排列紊乱且缩短,初始基质前沿(PMF)大部浅染;骨痂内新骨形成面积明显减少而髓腔中单位面积内脂肪细胞的数量增加(P<0.01)。X线摄片检查表明:实验组与对照组相比骨折断端新形成的骨痂量明显减少;Western blot及QPCR检查结果显示:实验组与对照组相比骨痂组织中PPARγ及AP2的表达增加(P<0.01)。结论:T2DM大鼠骨折牵引成骨骨痂生成障碍,骨组织中PPARγ及AP2的表达上调,可能是导致T2DM骨折愈合障碍的机制之一。