胸腺基质淋巴生成素对肺癌患者辅助性T细胞极化的影响

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目的:通过建立DC体外模型的方法,研究胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin, TSLP)对肿瘤免疫Th1/Th2漂移的影响,更进一步拓展Th细胞的分化机制,也为免疫治疗开辟新的途径。本实验通过检测TSLP在肺癌患者中的表达和TSLP刺激后DC的表型和细胞因子分泌的影响,以及观察TSLP-DC对Th细胞分化的影响,探讨Th1/Th2漂移的免疫学机理及其在肺癌发病及病情发展中的作用。方法:本实验收集30例肺癌患者的肿瘤组织、正常肺组织、转移和未转移淋巴结组织,采用免疫组化方法检测TSLP表达,分析TSLP在肺癌肿瘤组织、正常肺组织及转移淋巴结和未转移淋巴结中的表达评分差异;收集肺癌患者外周血,应用GM-CSF和IL-4诱导单核细胞分化为DC作为体外模型,分别用脂多糖(LPS)、rhTSLP或rTSLP+LPS诱导成熟,经流式细胞术检测细胞表面分子的表达变化;ELISA方法检测DC细胞因子变化。采用磁珠分选CD4+T细胞,并分别将imDCs、DCs/LPS、DCs/TSLP与CD4+T细胞共培养,以诱导Th细胞分化,用计数Y-干扰素(IFN-γ)与重组人白细胞介素-4(IL-4)释放的酶联免疫斑点试验(ELISPOT),计算每组释放IFN-γ与IL-4细胞数,判断rhTSLP诱导的CD4+T细胞的分化方向。结果:免疫组化结果显示,TSLP在正常肺组织不表达或极低量表达,在肿瘤组织及阳性淋巴结中的评分都显著高于阴性淋巴结(P<0.05),在肺癌组织中的表达量又显著高于转移淋巴结(P<0.05)。流式细胞仪检测DC表型结果显示:TSLP-DC组和LPS-DC组表面标志物(包括CD83、CD86、CD11c、CD14、OX40L、HLA-DR)表达无显著差异,TSLP-DC组和LPS-DC组CD83与CD86表达显著高于im-DC组。ELISA检测DC上清结果显示:刺激后的DC培养上清液的ELISA检测结果显示,LPS-DC组的IL-6、IL-12、TNF-α、IL-10显著高于im-DC组与TSLP-DC组(P<0.05),而后两者没有差异;TSLP-DC组的TGF-β显著高于LPS-DC组与im-DC组(P<0.05),后两者没有差异;而IFN-γ在各组之间没有差异(P=0.19), LPS-DC组与im-DC组间比较(P=0.088)。DC细胞与CD4+T细胞共孵育后ELISPOT结果示:IL-4因子ELISPOT结果示:TSLP-DC组斑点计数显著高于im-DC组及LPS-DC组,后两者没有显著差异;IFN-γ因子ELISPOT结果示,TSLP-DC组斑点计数显著低im-DC组及LPS-DC组,后两者没有显著差异。结论:(1)TSLP在肿瘤组织及阳性淋巴结中的表达都显著高于阴性淋巴结,在正常肺组织中无表达或低表达,提示TSLP在肿瘤组织中的表达,可能与肿瘤的转移和进展有一定的相关性;(2) TSLP可诱导DC的分化成熟,与未经任何刺激的DC相比,经TSLP刺激的DC与LPS-DC相似,能显著上调共刺激分子CD86和成熟标志CD83的表达,且CD11c、CD14、OX40L及HLA-DR的表达两组间则无统计学差异。(3)经TSLP刺激后DC不表达或低表达IFN-γ、IL-12、TNF-α、IL-10和IL-6,却分泌大量的TGF-β1。(4)经TSLP作用的DC具有诱导CD4+T细胞向Th2型细胞分化作用。
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