【摘 要】
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带3蛋白,又称阴离子交换蛋白1(Anion Exchanger1,AE1),是红细胞膜上一种重要的跨膜糖蛋白质,介导Cl/HCO的跨膜交换过程,它由3个结构域组成,其中C端域的结构与功能尚未完全阐
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带3蛋白,又称阴离子交换蛋白1(Anion Exchanger1,AE1),是红细胞膜上一种重要的跨膜糖蛋白质,介导Cl<->/HCO<,3><->的跨膜交换过程,它由3个结构域组成,其中C端域的结构与功能尚未完全阐明,该研究在课题组已有工作基础上,采用酵母双杂交和哺乳动物双杂交系统,重点研究了带3蛋白C端域与血型糖蛋白AC-末端及肿瘤相关蛋白P16的相互作用,主要研究内容和结果如下:1.该实验利用truncation的方法构建了用于酵母双杂交系统的一系列带3蛋白C-末端突变体的AD端表达载体,并用同样的方法构建了酵母双杂交系统的GPA截断突变体的BD端表达载体.将重组酵母表达质粒pGADT<,7>-AE1-C-end-truncations和pGBKT<,7>-GPA-truncation进行分组实验,共同转化酵母菌AH109,并用营养缺陷培养选择和β-半乳糖苷酶活性检测进行分析.结果表明,带3蛋白C-末端与GPA有直接的相互作用关系.2.利用PCR的方法成功构建带3蛋白酸性C端域32个氨基酸残基和GPA C-末端的2个哺乳动物细胞表达载体后,与报告基因载体共转染HeLa细胞,ELISA方法检测出CAT蛋白表达量在实验组明显升高,这一结果表明带3蛋白酸性C端域32个氨基酸残基和GPA C-末端在哺乳动物细胞内具有很强的相互作用关系.3.利用穿梭位点成功构建带3蛋白C-末端132个氨基酸残基和P16的2个哺乳动物细胞表达载体后进行哺乳动物双杂交实验.它与带3蛋白C-末端的直接相互作用说明带3蛋白C-末端有P16的结合位点.上述研究结果不仅揭示了带3蛋白C-末端的结构和功能,同时为进一步研究带3蛋白在疾病、肿瘤发生和凋亡过程中的作用提供了线索.
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