论文部分内容阅读
目的:本实验旨在研究染色质重构复合物核心催化亚基(Brahma-related gene 1,Brg1)对C57BL/6小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞数量和功能的影响及探讨其可能的机制。方法:选取68周龄SPF级雌性野生型C57BL/6小鼠(Wild type,WT)及Ⅱ型肺泡上皮细胞(Alveolar Epithelial CellⅡ,AECⅡs)上特异性敲除Brg1的C57BL/6小鼠(Brg1fl/fl)作为实验对象,每组分别随机选取8只小鼠,收取标本,利用免疫组化及免疫荧光分析肺组织中表面活性物质相关蛋白-C(Surfactantassociated protein C,SFTPC)阳性的细胞率,流式细胞术分析小鼠肺组织中表面活性物质蛋白C前体蛋白(Prosurfactant Protein C,pro SP-C)阳性的细胞(即AECⅡs)数量。Western blot检测各组小鼠肺组织中pro SP-C、SFTPC、表面活性物质相关蛋白-A(Surfactantassociated protein A,SFTPA)、表面活性物质相关蛋白-D(Surfactantassociated protein D,SFTPD)的表达水平。Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达及增殖相关信号转导途径中关键蛋白EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT及NF-κB p65的活化水平。结果:抗SFTPC免疫组化、免疫荧光显示其在肺泡上皮表达较WT小鼠增多(P<0.05);流式细胞术显示Brg1fl/fl组小鼠肺组织中pro SP-C+的细胞百分比较WT小鼠明显增高(P<0.05),Western blot结果示AECⅡs的功能性性蛋白pro SP-C、SFTPC、SFTPA及SFTPD在Brg1fl/fl小鼠中明显增多;Brg1fl/fl组小鼠肺组织中NF-κB p65及周期蛋白CyclinD1的表达增加,且p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT百分比显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性敲除C57BL/6小鼠二型肺泡上皮细胞中的Brg1可促使AECⅡs数量和分泌功能的增加,其可能机制是与敲除Brg1促进E-GFR/PI3K/AKT/NF-κB信号通路的激活,且与增殖周期蛋白CyclinD1表达的增加相关。