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目的:
阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)是一种常见的中枢神经系统变性疾病,表现为进行性记忆力减退、痴呆、认知障碍、运动障碍。其特征性病理学改变是神经纤维缠结(neuofibrillary tangie,NFT),大量记忆性神经元数目减少,以及老年斑(seniteplaque,sp)的形成。β淀粉样蛋白(Aβ)是老年斑的主要成分,它的异常沉积是AD发病的重要危险因素。β淀粉样蛋白具有神经毒性,可诱导神经元凋亡。用Aβ25-35直接诱导PC12细胞凋亡建立AD细胞模型是体外进行AD研究的理想模型。
大麻作为一种古老的栽培植物,很早就有相关的记载。大麻中的主要化学成分是四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)。与THC不同的是,CBD是大麻中的非成瘾性成分,能阻碍THC对人体神经系统影响,并具有抗炎、抗惊厥、抗精神病、抗氧化、神经保护和免疫调节作用,大麻二酚是一种很强的抗氧化化合物,有些研究显示它有神经保护作用。
本实验以Aβ25-35损伤PC12细胞为模型并用CBD进行预处理,观察CBD对Aβ25-35诱导PC12细胞的存活率、细胞形态、凋亡率和细胞的SOD活性的影响,研究CBD是否对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有神经保护作用。
方法:
将培养的PC12细胞,用不同终浓度的CBD(0.1μmol/L,0.5μmol/L,1μmol/L,5μmol/L),处理2h,再加入10μmol/LAβ25-35(Aβ25-35临用前与37℃放置2d使其凝聚)继续培养。每次实验均分为正常对照组(0μmol/LAβ25-35)、Aβ25-35损伤组(10μmol/LAβ25-35)和CBD处理组(CBD+Aβ25-35)。1、用MTT法检测细胞存活率:将PC12细胞接种于96孔细胞培养板,分组分别加药,加入MTT20μl继续培养4h,加入DMSO150μl,用酶标仪在570nm波长处读取各组细胞的吸光值(OD值),减去背景OD值。2、采用HE染色法观察细胞形态。3、Annexin—V流式细胞仪检测凋亡率。将PC12细胞接种于25ml培养瓶中,将等体积的细胞悬液和PI染液混合,按分组分别加药。收集细胞制备单细胞悬液,送流式细胞仪检测。4、检测细胞内抗氧化酶SOD的活性。数据用SPSS16.0软件包进行分析,数据以均数±标准差表示,统计分析用t检验。认为P<0.05结果有统计学意义。
结果:
1、MTT法检测细胞存活率:Aβ25-35损伤组与对照组相比较OD值及细胞存活率显著降低,CBD处理组与Aβ25-35损伤组相比OD值及细胞存活率显著升高。具有浓度依赖性。
2、HE染色及电镜观察:(1)对照组:正常PC12细胞单层生长,胞体饱满,细胞数量多,细胞间联系紧密,相互交织成簇状;(2)Aβ25-35损伤组:胞核固缩、胞浆皱缩,细胞数量明显减少;(3)CBD处理组:部分细胞可见胞核固缩,细胞数量较Aβ25-35损伤组明显增多。
3、流式细胞仪检测凋亡率:A损伤组细胞凋亡百分率明显升高,CBD处理组细胞凋亡百分率明显降低。
4、SOD活性的检测:Aβ25-35损伤组PC12细胞SOD的活性明显下降,CBD处理组PC12细胞SOD的活性较Aβ25-35损伤组明显提高,有显著性差异。
结论:
CBD可以抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞存活率降低和凋亡率增高,抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞SOD的活性降低。对细胞损伤具有一定保护作用。
阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)是一种常见的中枢神经系统变性疾病,表现为进行性记忆力减退、痴呆、认知障碍、运动障碍。其特征性病理学改变是神经纤维缠结(neuofibrillary tangie,NFT),大量记忆性神经元数目减少,以及老年斑(seniteplaque,sp)的形成。β淀粉样蛋白(Aβ)是老年斑的主要成分,它的异常沉积是AD发病的重要危险因素。β淀粉样蛋白具有神经毒性,可诱导神经元凋亡。用Aβ25-35直接诱导PC12细胞凋亡建立AD细胞模型是体外进行AD研究的理想模型。
大麻作为一种古老的栽培植物,很早就有相关的记载。大麻中的主要化学成分是四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)。与THC不同的是,CBD是大麻中的非成瘾性成分,能阻碍THC对人体神经系统影响,并具有抗炎、抗惊厥、抗精神病、抗氧化、神经保护和免疫调节作用,大麻二酚是一种很强的抗氧化化合物,有些研究显示它有神经保护作用。
本实验以Aβ25-35损伤PC12细胞为模型并用CBD进行预处理,观察CBD对Aβ25-35诱导PC12细胞的存活率、细胞形态、凋亡率和细胞的SOD活性的影响,研究CBD是否对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有神经保护作用。
方法:
将培养的PC12细胞,用不同终浓度的CBD(0.1μmol/L,0.5μmol/L,1μmol/L,5μmol/L),处理2h,再加入10μmol/LAβ25-35(Aβ25-35临用前与37℃放置2d使其凝聚)继续培养。每次实验均分为正常对照组(0μmol/LAβ25-35)、Aβ25-35损伤组(10μmol/LAβ25-35)和CBD处理组(CBD+Aβ25-35)。1、用MTT法检测细胞存活率:将PC12细胞接种于96孔细胞培养板,分组分别加药,加入MTT20μl继续培养4h,加入DMSO150μl,用酶标仪在570nm波长处读取各组细胞的吸光值(OD值),减去背景OD值。2、采用HE染色法观察细胞形态。3、Annexin—V流式细胞仪检测凋亡率。将PC12细胞接种于25ml培养瓶中,将等体积的细胞悬液和PI染液混合,按分组分别加药。收集细胞制备单细胞悬液,送流式细胞仪检测。4、检测细胞内抗氧化酶SOD的活性。数据用SPSS16.0软件包进行分析,数据以均数±标准差表示,统计分析用t检验。认为P<0.05结果有统计学意义。
结果:
1、MTT法检测细胞存活率:Aβ25-35损伤组与对照组相比较OD值及细胞存活率显著降低,CBD处理组与Aβ25-35损伤组相比OD值及细胞存活率显著升高。具有浓度依赖性。
2、HE染色及电镜观察:(1)对照组:正常PC12细胞单层生长,胞体饱满,细胞数量多,细胞间联系紧密,相互交织成簇状;(2)Aβ25-35损伤组:胞核固缩、胞浆皱缩,细胞数量明显减少;(3)CBD处理组:部分细胞可见胞核固缩,细胞数量较Aβ25-35损伤组明显增多。
3、流式细胞仪检测凋亡率:A损伤组细胞凋亡百分率明显升高,CBD处理组细胞凋亡百分率明显降低。
4、SOD活性的检测:Aβ25-35损伤组PC12细胞SOD的活性明显下降,CBD处理组PC12细胞SOD的活性较Aβ25-35损伤组明显提高,有显著性差异。
结论:
CBD可以抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞存活率降低和凋亡率增高,抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞SOD的活性降低。对细胞损伤具有一定保护作用。