冷冻治疗技术是一种比较安全的治疗手段,可减少术中出血,减轻疼痛,可增强机体免疫力,抑制及破坏肿瘤细胞生长,促使转移病灶的吸收。由于冷冻外科具有上述的优点,在医学界得到广泛的重视,临床上已得到广泛的应用。冷冻手术现在已广泛用于皮肤、肿瘤、妇科、泌尿科以及肝脏等各种疾病的治疗。用冷冻治疗前列腺癌肿瘤时,因为前列腺底部与直肠临近,冷量过大会伤及直肠,引起并发症,所以无法达到安全的冷冻边界,使得冷冻边界部分细胞存活,引发疾病的复发。因此,单纯冷冻疗效还是有限的,以冷冻为基础的各种疗法的联合应用是冷冻治疗发展的必然趋势。冷冻与化疗药物联合应用具有协同杀死肿瘤的作用,但两者联合过程中,加药的时间以及药物的剂量控制都有待进一步的研究。本文对冷冻-5-FU联合应用过程中不同加药时间对前列腺癌(PC-3)细胞活率的影响以及冷冻后在不同时间点细胞凋亡情况进行了研究。 首先,进行了置核实验的研究,并对人的PC-3细胞在慢速冷冻过程中的变化进行了观察。通过两种不同置核方式的比较得出,冷台需要在-4℃置核,才能出现冰晶,而用预冷针头只需在-1.5℃置核,就能出现冰晶。但用冷台置核时,不用将冷台盖旋下,可以避免空气对溶液的影响。所以本实验中,都是利用冷台系统本身的特点进行置核。细胞悬液置核后,降温速率为5℃/min时,细胞外冰晶呈枝状生长,PC-3细胞体积变小,复温后细胞体积稍微增大。 其次,研究了慢速冷冻过程中降温速率、复温速率及冷冻终温对PC-3细胞活率的影响,并对冷冻后细胞的死亡方式进行了分析。实验结果表明,在相同终温条件下,降温速率越快、复温速率越慢,细胞的活率愈低。不同终温时,温度越低,细胞的活率越低。冷冻后PC-3细胞用Hoechst 33342和PI双染的方法分析表明,细胞死亡的方式有三种:细胞凋亡、细胞坏死和细胞破裂,但主要方式为细胞坏死和细胞破裂。 最后,研究了冷冻-5-FU联合应用过程中不同加药时间对前列腺癌(PC-3)细胞活率的影响以及不同加药时间对细胞死亡方式的影响。实验考察了冷冻前加药、冷冻同时加药以及冷冻后加药三种不同时间加药对PC-3细胞的影响,并与单独冷冻进行了比较。结果显示,在冷冻后的再培养过程中,冷冻前加药和冷冻后加药细胞的活率明显低于单独冷冻时细胞的活率,而冷冻同时加药细胞的活率高于单独冷冻的。用流式细胞仪分析冷冻后细胞在不同时间点细胞的凋亡数表明,冷冻后加药细胞的凋亡数高于其他组。