梨种质资源亲缘关系分析及类黄酮遗传多样性研究

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遗传多样性的研究方法主要有表型观测方法、生物化学方法和分子生物学方法。本文采用分子生物学及生物化学的方法研究梨种质资源的遗传多样性。一是采用共显性遗传的SSR分子标记,以中国原产的砂梨品种为主要研究试材,研究其遗传多样性,并研究中国砂梨品种与白梨、砂梨、秋子梨、西洋梨的主要栽培品种及日本砂梨品种之间的亲缘关系,以探讨梨品种演化的途径;二是采用分光光度法及高效液相色谱研究梨种质资源果实总黄酮含量及类黄酮组成及水平,挖掘类黄酮含量极高的种质资源,为梨果实功能成分开发提供新的途径。主要研究结果如下:1.采用SSR标记荧光测序技术,苹果和梨基因组中开发的9对SSR引物在106份供试的梨材料中均成功扩增出1或2个等位基因,可用于建立梨种质资源SSR标记的指纹图谱。2.SSR引物在供试的106份白梨、砂梨、秋子梨、西洋梨材料中总共扩增出147个等位基因,每个位点的等位基因数量11-23个,平均值为16.3;预期杂合度(He)范围为0.31-0.89,平均值为0.78;观察杂合度(Ho))范围为0.27-0.83,平均值为0.60;多态性信息含量(PIC)范围为0.29-0.88,平均值为0.77。其中,在供试的87个中国砂梨中总共扩增出138个等位基因,每个位点的等位基因数量10-21个,平均值为15.%预期杂合度(He)范围为0.29-0.89,平均值为0.77;观察杂合度(Ho))范围为0.29-0.84,平均值为0.60;多态性信息含量(PIC)范围为0.28-0.88,平均值为0.75。3.利用SSR标记获得的基因型数据,106份梨种质资源材料聚类图显示2个大组,分别为亚洲梨和欧洲梨,表明亚洲梨与欧洲梨亲缘关系较远。亚洲梨种质资源的亲缘关系与地理位置相关。亚洲梨中4个秋子梨品种,即‘八里香’、‘京白梨’、‘满园香’、‘南果梨’聚在一起,与砂梨品种亲缘关系较远。而供试白梨品种分散聚类在不同的砂梨组中。原产于东北的‘苹果梨’和‘秋白梨’与北方组的砂梨亲缘关系较近;原产于黄河流域和华北平原的‘砀山酥梨’、‘茌梨’、‘鸭梨’与黄-淮组的砂梨亲缘关系较近。表明至少有一部分白梨品种起源上与砂梨相关;供试的日本梨品种与中国浙江、江西和云南的砂梨部分品种亲缘关系较近。其中‘小梅梨’与‘丰水’、‘长十郎’、‘新世纪’相似系数分别高达0.75、0.72和0.69;‘江湾糖梨’与‘丰水’、‘长十郎’、‘新世纪’的相似系数分别高达0.62、0.80和0.77。4. TP-M13-SSR方法具有经济、灵敏、高效等优点,当利用数量很多的SSR标记引物对梨的若干材料进行遗传多样性研究时,可以采用TP-M13-SSR自动荧光检测系统。5.本研究测定了186份梨种质资源的果实总黄酮含量,结果表明,梨种质资源果实总黄酮含量为188.6-6773.0 mg·kg-1,平均值825.7 mg·kg-1。野生资源果实总黄酮含量明显高于栽培品种。6.通过高效液相色谱分析,在供试的186份梨种质资源果实中,共检测出10种类黄酮,即熊果苷、表儿荼素、原花青素B1、槲皮素-葡萄糖苷、原花青素B2、原花青素C1、槲皮素-芦丁糖苷、儿茶素、槲皮素-半乳糖苷、槲皮素-阿拉伯糖苷,其含量平均值分别为:1264.81 mg·kg-1、24.80 mg·kg-1、23.38 mg·kg-1、18.47 mg·kg-1、15.19 mg·kg-1、15.07 mg·kg-1、5.35 mg·kg-1、2.61 mg·kg-1、2.04 mg·kg-1、0.24 mg·kg-1;未检测出根皮苷、槲皮素、槲皮素-阿拉伯-葡萄糖苷、槲皮素-木糖苷、槲皮素-鼠李糖苷、矢车菊素-半乳糖苷、矢车菊素-阿拉伯糖苷、矢车菊素-葡萄糖苷8种类黄酮。7.‘内蒙山梨’、‘豆梨’、‘赞皇杜梨’、‘灵武杜梨’、‘尖把梨’、‘花盖梨’、‘冬蜜’、‘红那禾’、‘大香水’和‘黄县长把’总黄酮含量较高;‘内蒙山梨’果实的表儿茶素、儿茶素、原花青素B2、原花青素C1、槲皮素-芦丁糖苷、熊果苷含量均较高,‘花盖梨’表儿茶素、儿荼素、原花青素B2、原花青素C1、槲皮素-葡萄糖苷含量均较高。
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