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1目的肺癌是原发于肺部的严重危害人类危害人类健康和生命的恶性肿瘤,在世界范围内,其是导致癌症死亡的最主要的原因,其死亡率在我国城市中已居于恶性肿瘤之首。在世界上许多国家肺癌已成为最常见的恶性肿瘤,在韩国,肺癌已超越胃癌成为癌症死亡的头号原因,新确诊的非小细胞肺癌的病例中大约35-40%的患者为非小细胞型和局部晚期非小小细胞肺癌(非小细胞肺癌),尤其老年人是其高发人群。最近几年的多项研究显示肺癌由于细胞增殖和分化的异常,即原癌基因被激活、抑癌基因的失活导致细胞群体内存活与死亡的平衡被破坏,还与异常的细胞凋亡有关。TRAIL是肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体,Bcl-2基因(即B细胞淋巴瘤／白血病-2基因)是一种原癌基因。研究表明TRAIL是一种促凋亡基因,Bcl-2是抑凋亡基因之一。本实验通过研究TRAIL、Bcl-2相关凋亡基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的相关性及表达情况,来探讨TRAIL、Bcl-2如何参与NSCLC的发病机制,以及两者的临床生物学意义,为NSCLC的及早发现、及时治疗提供实验理论依据。2对象与方法2.1研究对象为2009年1月-2011年11月间郑州大学第一附属医院病理科所保存的60例NSCLC的组织标本为实验组,这60例标本均为胸外科手术切除、并经病理证实为NSCLC:作为对照组的是从选出来的60例NSCLC标本中选取20例癌旁正常肺组织(即距肿瘤边缘大于3cm并经病理证实为正常的肺组织)；入选的所有肺癌病人术前均未接受任何抗肿瘤治疗。2.2实验方法采用免疫组织化学法(S-P法)检测TRAIL、Bcl-2在肺鳞癌、肺腺癌及癌旁正常肺组织中的表达；凋亡细胞的检测采用TUNEL法,并计算凋亡指数(AI)。2.3结果判定标准2.3.1TRAIL、Bcl-2的阳性结果判定标准在高倍视野(20×10)下,随机选择5个视野进行阳性结果判断,而且每个视野要有阳性细胞,每个视野的计100个细胞,共500个细胞；TRAIL阳性细胞为细胞核内出现棕黄色颗粒,Bcl-2阳性细胞为胞浆/胞核内出现棕黄色颗粒计为,细胞核无着色；判定方法为：(1)评分标准为阳性细胞百分比：0分：0%,1分：<10%,2分：10%-50%,3分：>50%；(2)评分标准为细胞染色深浅：无棕黄色颗粒,与背景无区别为0分；有棕黄色颗粒,明显高于背景底色为1分；有染色较清晰的棕黄色颗粒,介于强弱之间为2分；有大量的深棕色颗粒,染色强为3分；染色强度与阳性细胞所占百分数综合后进行判定,即(1)+(2)：最后得分≥4分为表达阳性(+),<4分为表达阴性(一)。2.3.2凋亡细胞的阳性结果判定及凋亡指数AI的计算用TUNEL法进行检测凋亡细胞,凋亡细胞为所测得的细胞核染成棕黄色的细胞；凋亡指数(AI)的计算：在高倍视野下(40×10)随机选取10个视野观察,计算凋亡细胞与所计数细胞总数的比值,即AI=凋亡细胞数/细胞总数×100%。2.4统计学处理应用统计软件SPSS17.0进行数据分析；统计方法：卡方检验,配对资料的关联性分析,卡方检验的连续性校正及直线相关分析,以a=0.05为检验水准。3结果3.1TRAIL在正常肺组织和NSCLC组织中的表达及其与临床病理特征的关系TRAIL主要表达于正常肺组织上皮细胞,NSCLC细胞胞浆也有表达,但染色强度明显弱于正常肺组织,阳性细胞数也明显少于正常肺组织,染色为浅黄色至棕黄色。60例NSCLC组织中TRAIL的阳性表达率为45.0%(27/60),20例正常肺组织的阳性表达率为60.0%(12/20),差异有统计学意义(χ2=13.144,P=0.000)。TRAIL在NSCLC高分化组中的阳性表达率为60.0%,中、低分化组的阳性表达率为18.0%,差异有统计学意义(χ2=5.760,P-=0.016)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期的阳性表达率为38.9%,Ⅲ、Ⅳ期的阳性表达率为4.2%,差异有统计学意义(χ2=9.259,P=0.002)。TRAIL在有淋巴结转移的NSCLC患者中的阳性表达率为3.7%,无淋巴结转移者阳性表达率为42.4%,差异有统计学意义(χ2=11.874,P=0.001)。TRAIL的表达与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤直径、病理分型、是否吸烟及有无胸膜转移无关。3.2Bcl-2在正常肺组织和NSCLC组织中的表达及其与临床病理特征的关系Bcl-2主要定位于胞浆或胞核。60例NSCLC组织中Bcl-2的阳性表达率为68.3%(35/60),20例正常肺组织的阳性表达率为25.0%(5/20),差异无统计学意义(χ2=2.526,P=0.086)。Bcl-2在NSCLC高分化组中的阳性表达率为10.0%,中、低分化组阳性表达率为54.0%,差异有统计学意义(χ2=4.835,P=-0.028)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期的阳性表达率为33.3%,Ⅲ、Ⅳ期的阳性表达率为66.7%,差异有统计学意义(χ2=6.429,P=-0.011)。Bcl-2在有淋巴结转移的NSCLC患者中的阳性表达率为74.1%,无淋巴结转移者阳性表达率为24.2%,差异有统计学意义(χ2=14.816,P=0.000)。Bcl-2的表达与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤直径、病理分型、是否吸烟及有无胸膜转移无关。3.3NSCLC组织中TRAIL和Bcl-2表达的相关性经配对资料的关联性分析,得出TRAIL和Bcl-2在NSCLC组织中的表达存在关联性,为负相关(χ2=8.929,P=0.000,r=-0.866)。3.4TRAIL、Bcl-2与细胞凋亡之间的关系直线相关分析得出,TRAIL积分与凋亡指数AI成正相关(r=0.663,P=0.000),Bcl-2积分与凋亡指数AI成负相关(r=-0.736,P=0.000)。4结论1、TRAIL基因的异常表达可能在NSCLC的发生、发展中起到一定作用。TRAIL有望成为新的肿瘤标记物。2、TRAIL蛋白的表达与肺癌的分化程度、TNM分期关系密相关。3、检测TRAIL可能有助于临床TNM分期。4、Bcl-2在肺癌的组织分型有关。