背景与目的：原发性肝癌(primary liver cancer)是临床常见的恶性肿瘤之一,在世界范围内其发病率居于恶性肿瘤的第五位,死亡率居第三位。全世界每年约有75万例肝癌新确诊病例,70万例死亡病例,其中约有一半发生在中国。肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)作为最主要的组织学亚型占原发性肝癌的70-85%。约有78%的HCC是源于HBV(53%)或HCV(25%)所致的慢性感染。近年来肝癌的治疗研究取得了较大的进展,但因为其高转移率和高复发率的特性,总体预后仍然不乐观。肿瘤的生物学特性是影响预后的最根本因素,而癌的转移复发恰是癌生物学特性最集中的表现。因而,对肝癌细胞增殖、侵袭转移相关领域的实验研究不但具有重要的理论意义,而且具有重要的科研和临床应用价值。T细胞免疫球蛋白及粘蛋白分子3(T cell immunoglobulin and mucin domain3,Tim-3)最早被发现其表达于终末分化的Thl细胞上,是区分Thl和Th2细胞的表面标志。进一步研究发现在CD8T细胞、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)、Th17、树突状细胞(dendritic cells,DC)、自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)、巨噬细胞、肥大细胞和其他淋巴细胞亚群都存在Tim-3的表达,并对细胞因子分泌起着重要的调节作用,从而在多细胞水平上参与肿瘤免疫。目前的研究证明Tim-3的表达与肿瘤相关的免疫抑制显著相关。近来,Tim-3被发现反常表达于黑色素瘤细胞,并使肿瘤细胞粘附力降低,促进肿瘤进展。Zhuang等也发现tim-3高表达于非小细胞肺癌,且这种表达是患者的独立预后因素。但Tim-3与HCC的关系报道较少,尚需进一步研究。本课题旨在研究探讨Tim-3在HCC组织中的表达,分析其与患者临床病理特征的关系,探寻其临床意义；并深入研究Tim-3在HCC中的表达及其对肿瘤进展的作用。有助于阐明Tim-3在肝癌诊断、治疗、预后判断中的应用价值。方法：1.标本收集：收集2012年10月至2013年8月临床手术切除的肝细胞肝癌组织标本20例,包括癌组织及对应癌旁组织；手术切除的血管瘤或肝外伤切除的正常肝脏组织标本4例。实验室冻存的肝癌细胞株2组(HepG2、SMMC7721),人正常肝细胞系1组(L02)。2.Tim-3在HCC中的表达检测：(1)采用荧光实时定量PCR (Real-time fluorescent quantitive polymerase chain reaction, Real-time PCR)和蛋白质印迹(Western blot)方法检测Tim-3在20例肝癌组织、对应癌旁组织及4例正常肝脏组织中的表达。对比其在上述组织间的表达差异；分析Tim-3在肝癌组织中的表达情况与患者临床病理学特征的相关性。(2)采用Real-time PCR和Western blot方法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测肝癌细胞株HepG2、SMMC7721与人正常肝细胞株L02中Tim-3的表达情况,并选取表达最显著的细胞株进行下一步实验。3.T i m-3与肝癌细胞的增殖、迁移等生物学特性的关系研究：应用RNA干扰技术转染肝癌细胞株下调Tim-3的表达,采用MTT实验、细胞划痕实验检测Tim-3对肝癌细胞增殖、迁移能力的影响。结果：1.肝细胞性肝癌组织中Tim-3的表达明显高于癌旁组织及正常肝组织,肝癌组织中Tim-3的表达与肿瘤病理分级、门静脉癌栓存在相关性,在患者不同年龄、性别、AFP、HBV感染、肝硬化、肿瘤大小、肿瘤数目、Child-Pugh分级、TNM分期等的表达无差异性。2.人HCC细胞株HepG2、SMMC7721中Tim-3mRNA和蛋白的表达均较正常肝细胞株L02明显增高。转染Tim-3siRNA后,肝癌细胞株HepG2中Tim-3蛋白水平表达明显降低。与对照组比较,细胞的增殖、迁移能力显著下降。结果提示：Tim-3能够促进细胞增殖、迁移。结论：1.Tim-3在HCC组织中表达增强,其异常表达可能与肿瘤的侵袭、转移有关。2.Tim-3在肝癌细胞株中表达增强,可促进肝癌细胞增殖、迁移。