【摘 要】
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目的人体循环中的非血小板核糖核酸粒子(Non-platelet RNA particles,NPRPs)能够参与组织再生、修复损伤等过程,具有与间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSCs)及细胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)相似的修复再生特性。NPRPs或与MSCs联合应用有望提高MSCs细胞替代治疗的疗效。本实验旨在通过将人体外周血中的NP
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目的人体循环中的非血小板核糖核酸粒子(Non-platelet RNA particles,NPRPs)能够参与组织再生、修复损伤等过程,具有与间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSCs)及细胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)相似的修复再生特性。NPRPs或与MSCs联合应用有望提高MSCs细胞替代治疗的疗效。本实验旨在通过将人体外周血中的NPRPs与MSCs共培养以明确NPRPs对MSCs的增殖、细胞周期及表面标记物的表达是否存在影响,为提高或改进MSCs疗效提供新的理论依据。方法在无菌环境中,通过高速离心法从人体外周血中获取NPRPs进行培养,取原代MSCs进行传代培养。将不同浓度或量(0ul、20ul、40ul、60ul、80ul、100ul)的NPRPs与P4代MSCs于3个96孔板中共培养,将加入0ul NPRPs组记为对照组,加入20ul、40ul、60ul、80ul、100ul NPRPs组分别记为实验组I、II、III、IV、V组,每组设置6个平行副孔,3个孔板分别于24、48、72小时后用MTT法检测各组间充质干细胞吸光度值,记录数据,通过公式计算出各组MSCs相对增殖率;将不同浓度或量(0ul、200ul、400ul、600ul、800ul、1000ul)的NPRPs与P4代MSCs于6孔板中共培养,加入0ul记为对照组,加入200ul、400ul、600ul、800ul、1000ul分别记为实验组I、II、III、IV、V组,48小时后用流式细胞仪检测MSCs细胞周期及表面标记物的表达,通过公式根据细胞周期结果计算出MSCs增殖指数;用SPSS 20.0统计软件分析数据,得出结论。结果1:共培养24h后,实验组I-V组、对照组MSCs相对增殖率组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05);共培养48h后,实验组IV、V组MSCs相对增殖率与对照组MSCs相对增殖率比较差异有统计学意义(P<0.05),其余各组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05);共培养72h后,实验III组MSCs相对增殖率与对照组MSCs相对增殖率比较差异有统计学意义(P<0.05),实验IV、V组MSCs相对增殖率与对照组MSCs的相对增殖率比较差异有显著统计学意义(P<0.01),其余各组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。且NPRPs的浓度(量)与共培养不同时间的MSCs相对增殖率的相关性均有显著统计学意义(P<0.01)。2.共培养48h后,MSCs的G0/G1期各实验组与对照组组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05);G2/M期各实验组与对照组组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05),S期各实验组与对照组组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05);且各实验组与对照组的MSC增殖指数组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.共培养48h后,MSCs表面标记物(Ig G1、CD44、CD73、CD90、CD105、CD29、CD34、CD45、HLA-DR)的表达量各实验组、对照组组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论NPRPs对MSCs增殖有促进作用且NPRPs浓度与MSCs增殖率具有显著相关性,NPRPs对MSCs的细胞周期及表面标记的表达无显著影响。
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