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禽戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）是2001年由美国学者从患肝炎脾大综合症（hepatitis-splenomegaly, HS）或大肝大脾病（Big liver and spleen disease, BLS）的鸡中分离出的一种新型病毒。该病毒主要引起肝炎脾大综合症，导致30-72周龄的肉种鸡和蛋鸡的产蛋率下降（20%-40%），易产软壳蛋，死淘率升高（1%-4%），感染鸡通常腹部充血，肝脏的淀粉样变性，伴随有肝脏和脾脏的肿大。禽HEV的基因组全长为6.6kb，由3个开放阅读框（Open Reading Frame, ORFs）和两个非编码区组成。第一个开放阅读框（ORF1）编码一个含多个功能域的非结构蛋白，ORF2编码非结构蛋白，和ORF2部分重叠的ORF3编码一种小的磷酸化蛋白。一直以来对ORF3功能的研究仍相对较少，大多集中在ORF2编码的衣壳蛋白上，ORF2蛋白含多个抗原表位，是疫苗研究的重点。但近年来发现，ORF3蛋白在病毒颗粒的装配释放、细胞信号转导、细胞骨架装配等方面均发挥重要作用，并且含有能够刺激动物机体产生强烈免疫反应的抗原表位。本研究采用大肠杆菌原核表达系统对禽HEV ORF3蛋白进行了表达和纯化，获得了高纯度的ORF3蛋白，抗原性分析发现其具有很好的抗原性；随后，将表达纯化后完整的HEV ORF3蛋白免疫8周龄SPF肉鸡，同时设PBS对照组。第二次免疫两周后，对两组鸡群（28只鸡）进行CaHEV攻毒，肌肉注射，含毒量104GE/ml。分别在攻毒后不同天数对鸡群血清、粪便以及剖杀鸡只的肝脏脾脏组织和胆汁进行收集。攻毒前血清抗体效价检测结果显示，ORF3蛋白免疫后鸡只产生了较高的抗体水平；而病毒攻毒后免疫组的鸡群抗体转阳后的血清抗体水平明显低于对照组；通过提取粪便中病毒RNA，检测粪便排毒结果显示免疫组排毒鸡只数也明显降低；对肝脏、脾脏组织和胆汁中RNA的提取检测病毒载量结果发现，免疫组仅有36%的鸡检测到RNA，而对照组有79%的鸡检测到病毒RNA。免疫组出现病毒血症的严重程度低于对照组，且剖检后出现肝脏损害的鸡只数也显著降低。实验结果表明禽HEV ORF3蛋白免疫后对实验鸡群能起到部分的保护作用。本研究的结果为ORF3蛋白作为基因工程疫苗预防禽HEV感染的研究奠定了基础。