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目的:建立硬皮病小鼠模型,探讨硬皮病小鼠皮肤组织中炎症及纤维化相关因子的基因及蛋白水平的变化,从而进一步了解皮肤纤维化的发病机制。
方法:取BALB/C小鼠随机分成4组,每组10只,第一组(对照组1)连续隔日背部皮下注射500ul磷酸盐缓冲液(PBS,Phosphate Buffered Solution),共持续10天;第二组(硬皮病组1)连续隔日背部皮下注射500ul博来霉素(BLM,Bleomycin,200μg/ml),共持续10天;第三组(对照组2)连续隔日背部皮下注射500ulPBS,共持续20天;第四组(硬皮病组2)连续隔日背部皮下注射500ulBLM,共持续20天。分别于注射结束第二天取背部注射部位皮肤,观察皮肤组织病理改变:采用ELISA(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,酶联免疫吸附试验)方法测定硬皮病小鼠模型中Collagen(胶原)、JE/MCP-1/CCL-2(Monocyte Chemoattractant Protein-1,单核细胞趋化因子-1)、MMP3(MatrixMetalloproteinase3,基质金属蛋白酶3)、MMP9(Matrix Metalloproteinase9,基质金属蛋白酶9)水平的变化,采用实时定量PCR(Real-Time PCR,实时聚合酶链反应)检测皮损中Pro-CollagenⅠ,Pro-CollagenⅢ和JE的基因表达变化。用SPSS软件对两组的检测值作统计学分析。
结果:硬皮病小鼠皮肤组织硬化,病理可见真皮层明显增厚,胶原纤维增生,均质化等表现;皮损内Collagen,JE,MMP3,MMP9的水平升高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.001);Pro-CollagenⅠ,Pro-CollagenⅢ,JE的mRNA水平升高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.001)。
结论:博来霉素反复皮下注射可诱导建立硬皮病样小鼠模型,使其皮肤组织中胶原纤维增生,纤维化相关因子Collagen、JE、MMP3、MMP9的蛋白表达水平和Pro-CollagenⅠ,Pro-CollagenⅢ,JE的基因表达水平显著升高,提示这些因子的在硬皮病模型发病中的重要病理性作用,有助于进一步了解该病的发病机制,也为采用该模型的进一步研究打下基础。