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细胞分裂素是一种经典的植物激素,参与植物生长发育的多个方面。细胞分裂素在植物体内分布范围广,种类繁多,代谢途径复杂,所涉及的基因家族庞大,给其信号的精确定位及功能的研究带来了很多挑战。细胞分裂素信号的可视化,可以为研究细胞分裂素的合成、代谢及生物学功能提供有效手段,因此我们对水稻细胞分裂素信号水平的可视化工具进行了探索。在拟南芥中双元信号感受器TCS(Two Componentsignaling Sensor)可以特异性反映细胞分裂素信号水平,但是其在水稻中是否起作用目前还不清楚,我们研究了拟南芥TCS及其改良序列对水稻细胞分裂素信号的响应,实现了水稻细胞分裂素信号水平的可视化,为研究细胞分裂素在水稻生长发育中的作用奠定了基础。 首先通过对水稻细胞分裂素直接靶基因A型OsRRs上游3kb启动子区和编码区的分析,找到其核心应答元件并合成了4条特异序列分别命名为TCSn(TCS newsequence)1、2、3和TCSn-N(Negative control),其中TCSn-N将核心序列中的G突变为C。分别构建了TCSn-1、TCSn-2、TCSn-3、TCSn-N及拟南芥TCS与eGFP的融合表达载体。 原生质体瞬时转化实验结果显示TCS∷eGFP的表达最强,TCSn-1∷eGFP次之。激素敏感性实验表明TCSn-3∷eGFP和TCS∷eGFP可以受6-BA、反式玉米素和激动素的诱导表达,但对GA、NAA和ABA则无响应;其中TCS∷eGFP的表达,在低浓度6-BA处理时就达到了较高水平。表明TCSn-3∷eGFP和TCS∷eGFP可以特异性被细胞分裂素诱导表达,且三者对6-BA的敏感度存在差异,其中TCS∷ eGFP对细胞分裂素的响应最敏感。 在水稻体内细胞分裂素信号通过多步磷酸化(multistep phosphorelay,MSP)进行传递,其中A型OsRRs为其负调控因子,而B型ORRs是其正调控因子。我们发现A型OsRRs抑制TCS∷eGFP表达,而B型ORRs诱导其表达,说明TCS∷eGFP可以特异性的反映MSP活性。 我们的研究结果表明,拟南芥TCS可以特异灵敏的反映水稻细胞分裂素的信号水平,初步确定其可以作为水稻细胞分裂素信号的可视化工具,但还需要在水稻体内得到进一步的验证。