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目的采用胫骨腔内注射MRMT-1乳腺癌细胞联合腹腔注射吗啡,成功建立骨癌痛-吗啡耐受(bone cancer pain combined with morphine tolerance,BCP-MT)大鼠模型,通过检测不同时间点大鼠机械缩足阈(Paw withdrawal thresholds,PWT)变化,明确大鼠胫骨癌痛和骨癌痛-吗啡耐受出现时间点。观察电针对骨癌痛-吗啡耐受大鼠痛行为和蓝斑核μ阿片受体(μ opioid receptor,MOR)、Rab5阳性细胞表达及其共表达(MOR内吞)情况的影响,初步探讨电针抗大鼠吗啡耐受的蓝斑核MOR内吞调控作用机制。方法第一部分健康雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,随机分为假手术(sham BCP)组、骨癌痛(BCP)组、骨癌痛-吗啡耐受模型(BCP-MT)组。其中BCP组和BCP-MT组大鼠均于左胫骨髓腔内接种3μl MRMT-1乳腺癌细胞(3×104个)诱发骨癌痛,sham BCP组大鼠仅注入等量无菌PBS液。BCP-MT组于骨癌痛诱发次日起,以10mg/kg的剂量腹腔注射盐酸吗啡注射液(q12h),连续注射11d。分别于癌细胞接种前(base),接种后第 6d、8d、10d 及第 11d、15d、19d、21d(即吗啡注射第 1d、5d、9d、11d)8个时点检测各组大鼠患侧PWT的变化;于癌细胞接种后第21d,采用X线片拍摄BCP组大鼠胫骨及行HE染色观察各组大鼠胫骨病理变化;第二部分健康雌性SD大鼠50只,完全随机分为shamBCP组、BCP组、BCP-MT组、BCP-MT+EA组、BCP-MT+shamEA组。shamBCP组接受假手术处理;BCP组仅接受胫骨癌痛造模;其余三组大鼠均接受胫骨癌痛-吗啡耐受造模。BCP-MT组于骨癌痛成功诱发后(接种后第11d)开始腹腔注射吗啡(q12h),持续注射至结束;BCP-MT+EA组和BCP-MT+sham EA组大鼠于吗啡耐受模型后(接种后第22d)在吗啡注射后0.5h时分别介入电针和假电针(仅给予针刺破皮,不予通电)治疗。电针参数为取双侧"足三里"和"昆仑"穴,疏密波,频率为2/100Hz,强度为0.5-1.5mA(以0.5mA为步进,各刺激1Omin),每次刺激30min,每日1次,连续治疗7d。于癌细胞接种前(base),接种后第10d、11d、21d以及接种后第22d、24d、26d、28d(即电针治疗第1d、3d、5d、7d)8个时点检测各组大鼠患侧PWT变化及其电针镇痛效应。采用尼氏染色明确大鼠蓝斑核定位;采用荧光免疫组织化学法检测大鼠蓝斑核MOR、Rab5阳性细胞表达及两者共表达情况。结果第一部分癌细胞接种前,三组大鼠基础PWT无明显差异(P>0.05)。癌细胞接种后第10d起,BCP组大鼠PWT明显低于同期sham BCP组大鼠(P<0.01),一直持续至接种后21d;癌细胞接种后第11d(即吗啡注射第1d),BCP-MT组大鼠PWT均显著高于BCP组(P<0.01);连续多次注射吗啡后,BCP-MT组大鼠PWT呈下降趋势,至接种后第21d(即吗啡注射第11d)时,BCP-MT组大鼠PWT下降至同期BCP组水平(PP>0.05),且显著低于shamBCP组(P<0.01)。X线及HE染色结果显示,BCP组大鼠胫骨的骨皮质不连续,皮下可见肿大阴影;BCP-MT组大鼠胫骨上1/3处均可见癌细胞致肿块,质硬,且胫骨髓腔内布满MRMT-1癌细胞;而sham BCP组大鼠胫骨未见异常变化。第二部分癌细胞接种前和接种后第10d、11d和21d,三组大鼠患侧PWT均无统计学差异(P>0.05);接种后第22-28d(即电针治疗第1-7d),BCP-MT+EA组大鼠患侧PWT显著高于同期BCP-MT组和BCP-MT+sham EA组(P<0.01);以及BCP-MT+EA组大鼠PWT仍高于其吗啡注射第11d的水平(P<0.01)。BCP-MT+shamEA组大鼠PWT与BCP-MT组在各个时间点比较均无差异(P>0.05)。BCP组、BCP-MT组、BCP-MT+EA组、BCP-MT+shamEA组蓝斑核MOR、Rab5阳性细胞率及MOR+/Rab5+阳性率均低于sham BCP组(P<0.05或P<0.01);与BCP组比较,BCP-MT组大鼠MOR阳性细胞率无明显下降(P>0.05),Rab5阳性细胞率及MOR+/Rab5+阳性率均明显降低(P<0.05);BCP-MT+EA组大鼠MOR、Rab5阳性细胞率及MOR+/Rab5+阳性率均显著高于BCP组、BCP-MT组和 BCP-MT+shamEA 组(P<0.01),而 BCP-MT组和 BCP-MT+shamEA 组比较均无差异。结论MRMT-1建立骨癌痛大鼠给予腹腔连续吗啡注射11d可成功诱导癌痛-吗啡耐受模型,抑制蓝斑核MOR内吞可导致吗啡耐受产生;电针治疗可缓解骨癌痛大鼠吗啡耐受相关的痛觉过敏,部分翻转吗啡耐受的作用;电针能够提高大鼠蓝斑核MOR、Rab5阳性细胞表达,增加MOR与Rab5共表达,进而促进MOR内吞,可能是电针抗吗啡耐受的关键作用之一。