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目的:食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一,目前在其综合治疗中,外科手术及放疗仍然是首选的治疗方式,但是许多患者在发现时已经是中晚期,失去了手术和放疗的最佳时机,因此化疗亦占有非常重要的地位。然而食管癌在临床上多存在肿瘤的耐药,因而严重影响了物食管癌患者化疗的疗效及其预后。 谷胱甘肽转移酶(GSTs)是人体内较为重要的代谢解毒酶系统,广泛存在于生物体内。它能催化谷胱甘肽的巯基结合到内源性或外源性亲电子化合物上,使其极性提高,形成易溶于水的化合物排出体外,是与毒物或致癌物质解毒代谢有关的重要酶类。目前更多的研究发现GST-兀与肿瘤的发生及原发或继发性耐药相关。 藤梨根为猕猴桃科猕猴桃属软枣猕猴桃的根,具有清热解毒、祛风除湿、利尿止血的功效。临床上常用于恶性肿瘤的治疗,尤其对消化道肿瘤疗效颇佳。近年发现,藤梨根复方制剂体外对多种肿瘤有抑制作用,可通过多种途径发挥抗肿瘤作用,其药理研究和临床验证受到广泛关注。本项目以Ec9706/cDDP细胞系为研究对象,运用现代医学的技术手段以及量化指标,观察藤梨根提取物(RAE)是否通过降低耐顺铂食管癌细胞GST-π的表达,从而起到逆转食管癌化疗耐药的作用,具有较高的研究起点,也为中医药治疗食管癌的机制研究提供了一条可供参考的思路和方法。 方法:1、在含DDP(0.5ug/ml)的RPMI-1640培养基中培养Ec9706/cDDP;用MTT法检测藤梨根提取物细胞毒性作用,找到无毒浓度进行逆转耐药试验;用MTT法检测Ec9706/cDDP加与不加藤梨根提取物培养48h后细胞存活率,根据加与不加两组数据行直线回归统计计算出各组半数抑制浓度(IC50),计算逆转倍数=对照组IC50/试验组IC50。2、将细胞系分为实验组和对照组,实验组细胞系用藤梨根提取物干预,RT-PCR法分别检测以上两组细胞GST-π的表达。3、全部数据均用SPSS13.0统计软件包处理,数据以x±S表示,IC50计算采用直线回归,两组数据比较,采用t检验。 结果:1、藤梨根提取物对Ec9706/cDDP细胞存在细胞毒性作用,与藤梨根提取物浓度有关。1、5、10ug/ml组与对照组抑制率无统计学差异(P>0.05),藤梨根提取物100ug/ml,1mg/ml两组抑制率分别为18.3％,29.9%与对照组比较有显著意义(P<0.05)。故选用无毒藤梨根提取物浓度10ug/ml作为最佳逆转实验浓度。2、DDP单独作用,DDP对Ec9706/cDDP的IC50为43.59ug/ml,DDP与非细胞毒性剂量10ug/ml的藤梨根提取物共同作用,DDP对Ec9706/cDDP的IC50降低为26.27ug/ml,其逆转倍数为1.66。3、A组的10个样本中有8个GST-π基因呈高水平表达,其余2个呈低水平表达;B组的10个样本中有1个GST-π基因呈高水平表达,其余9个呈低水平表达。统计学分析表明GST-π基因在A、B两组的表达程度上有显著性差异(P<0.05)。 结论:藤梨根提取物可以逆转Ec9706/cDDP细胞株对顺铂的耐药,逆转效果与剂量相关,逆转机制可能与降低GST-π基因的表达有关。