银柴胡的化学成分研究及质量标准研究

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银柴胡为石竹科植物Stellaria dichotoma L.var.lanceolata Bge的干燥根,味甘、微寒,主产于宁夏地区,具有清虚热,除疳热之功能,用于阴虚发热,骨蒸痨热,小儿疳热等症。临床应用主要用于治疗小儿疳积发热,阴虚潮热,久病发热,感冒高热等疾病的治疗。近二十年来,国内外学者对其在生药、化学、药理、药剂及临床研究方面都有较大的进展。银柴胡的商品质量评价方面,文献记载多采用鉴别植物形态、性状、显微鉴别、理化实验、薄层色谱鉴别、荧光—标准色谱对照法、紫外光谱、红外光谱及一阶导数光谱等方法进行正伪品的鉴别及质量评价。文献记载在对银柴胡类生药的商品全国市场调查研究中,通过对收集到的27个省、市、自治区的88份银柴胡生药商品采用紫外光谱、红外光谱及一阶导数光谱进行鉴定,结果表明其中仅60%来源于中国药典品种,其余40%来源于非药典品种。52份来源于披针叶繁缕属,在全国24个省市使用,其中,约有2/3为1或2年生栽培品。商品中18%为灯心草蚤缀根,在10省区使用,其余22%来源于丝石竹属、蝇子草属和蚤缀属3个属的5种植物根。可见对银柴胡的市售商品质量评价的重要性。按照《中国药典》2000年版一部中药品种项下的研究,本论文首先对中药银柴胡的化学成分进行了研究,目的在于寻找其中特征性成分或指标成分,建立相应的含量测定方法,为《中国药典》提出质量标准草案及起草说明。在此基础上对银柴胡中含有的具有紫外吸收的成分进行HPLC指纹图谱的探索性初步研究。对银柴胡药材的乙醇提取物进行化学成分的系统研究。经溶剂萃取、大孔树脂吸附、聚酰胺柱层析、硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析、ODS柱层析、制备HPLC等分离手段,对银柴胡Stellaria dichotoma L.var.lanceolata Bge进行分离,得到11个化合物。采用理化性质和波谱技术(UV、IR、EI/MS、FAB/MS、NMR、13C-NMR、DEPT、1H-1HCOSY、13C-1HCOSY)相结合的方法鉴定了其中7个化合物,分别为豆甾-7-烯醇葡萄糖苷[stigmast-7-en- (3β,5α,24s)- 3-Oglu],豆甾-7-烯醇(24s)[stigmast-7-en-3-ol,(3β,5α,24s)-],豆甾-7-烯醇(24r)[stigmast-7-en-3-ol,(3β,5α)-],β-谷甾醇[stigmast-5-en-3-ol,(3β)-],β-carboline类生物碱:银柴胡碱C [Stellarine C]、银柴胡碱B [StellarineB]、银柴胡碱D [Stellarine D]。其中银柴胡碱C及银柴胡碱D为首次从该植物中分离得到,且初步确定为新化合物。确定银柴胡中含量较多的豆甾-7-烯醇(24s)为指标成分,银柴胡碱C为特征性成分之一。理化鉴别主要研究薄层色谱鉴别方法。为了使银柴胡的鉴别方法更准确、更具有专属性,采用了薄层色谱的方法,通过对10个市售不同的银柴胡进行薄层色谱条件的摸索,最终确定了以甲醇20ml超声处理45分钟作为供试品的制备方法,薄层条件使用硅胶G薄层板,苯-醋酸乙酯(10 : 2)为展开剂,在紫外光灯(365nm)下进行检识,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,可以同时观察到3个以上的相同斑点。由于豆甾-7-烯醇在紫外条件下没有吸收,所以按上述同一薄层色谱条件,用对照药材和对照品同时与本品进行比较,喷10%<WP=5>硫酸乙醇溶液显色。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上,可观察到一个相同的浅紫色斑点。该方法简便、快速、重现性好、结果可靠。对酸不溶性灰分进行检查,同《中国药典》2000年版一部银柴胡检查项下。 对重金属、砷盐和有机氯有机磷农药残留物的检查,用原子吸收光谱仪以及气相色谱等方法测定本品重金属、砷盐、有机氯以及有机磷的含量,测定结果显示本品重金属、砷盐及有机氯有机磷等农药残留均符合规定。浸出物测定参考《中国药典》2000年版一部附录ⅩA作醇溶性浸出物测定。测定结果暂定本品用甲醇做溶剂,照醇溶性浸出物项下冷浸法测定,浸出物含量不得少于20.0%。含量测定建立豆甾-7-烯醇的HPLC-ELSD含量测定方法,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Nova-pack C18柱,4.6mm×150mm,4μm),柱温40℃;甲醇-乙腈-水-甲酸-三乙胺(47.5 : 46 : 6.5 : 0.1 : 0.1)为流动相,流速1ml·min-1;蒸发光散射检测器检测,漂移管温度75℃,气体流速2.60 SLPM(标准升每分钟)。并进行相应的方法学考察。通过测定银柴胡道地药材及不同省市市售的10个样品,初步确定豆甾-7-烯醇在相应药材中的含量不得少于0.020%。实践证明该方法准确、简便,可以应用于银柴胡的质量控制。除对含量相对较高的豆甾-7-烯醇进行含量测定外,我们对分离得到的特征性成分银柴胡碱C(Stellarine C)进行了HPLC含量测定,采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Zorbax C18柱,4.6mm×250mm,7μm),柱温25℃;甲醇-水(70 : 30)为流动相;流速1ml·min-1;280nm波长检测。进行相应的方法学考察。通过测定银柴胡道地药材及不同省市市售的10个样品,结果表明银柴胡碱C在药材中的含量大概范围为0.009-0.073 mg/g。此方法简便、准确,对银柴胡的质量评价内容进行了补充。为了更有效地控制银柴胡的质量,综合评价不同市售银柴胡药材的质量,还对银柴胡中含有的具有紫外吸收的成分进行HPLC指纹图谱的探索性研究。?
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