HBV感染人外周血单个核细胞时体外免疫效应的变化

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目的:观察免疫耐受期的乙肝病毒感染者血清刺激正常人外周血单个核细胞(PBMCs)后出现的免疫效应变化。方法:用乙肝病毒的脱氧核糖核酸(HBV DNA)为2×10~7 IU/mL的免疫耐受期的乙肝病毒感染者血清刺激健康人的PBMCs,并设为实验组,刺激的时间一共为24天,另外设立未用感染者血清刺激的健康人PBMCs为对照组.CCK8法检测实验组和对照组中PBMCs的细胞数,ELISA法检测俩组中上清液里干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,流式细胞术检测CD8~+T细胞上程序性死亡受体-1(PD-1)阳性率。结果:在刺激的第8天,实验组中PBMC数量高于对照组,实验组TNF-α浓度[(1646.89±149.92)pg/ml]高于对照组[(1061.20±151.29)pg/ml,t=4.76,P=0.009],实验组IFN-γ的浓度[(134.00±15.10)pg/ml]高于对照组[(24.26±8.22)pg/ml,t=11.06,P=0.000]。刺激的第24天时实验组TNF-α浓度[(395.67±25.17)pg/ml]低于对照组[(576.33±15.18)pg/ml,t=-10.65,P=0.000],实验组IFN-γ的浓度[(14.05±1.65)pg/ml]低于对照组[(20.75±2.47)pg/ml,t=-3.91,P=0.017]。未开始刺激时,实验组与对照组CD8~+T细胞上PD-1阳性率均为(12.23±1.72)%,持续刺激24天后,实验组与对照组的PD-1表达水平分别为(16.70±1.65)%、(13.17±2.31)%。实验组刺激24天后PD-1表达水平高于未开始刺激时,且具有统计学差异(P=0.032),对照组第24天PD-1表达水平相比于未开始刺激时则无明显差异(P=0.605)。结论:1.HBV刺激PBMCs的初期,免疫细胞会出现增殖。2.TNF-α、IFN-γ的浓度均与HBV感染的时间有相关性。3.HBV刺激PBMC的过程中,TNF-α与IFN-γ浓度变化趋势基本一致,均出现先上升后下降的改变。4.HBV持续感染时,CD8~+T细胞表面抑制性受体PD-1表达上调。
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