人类基因组工作框架图的完成,标志着人类迈进了功能基因组研究的新时代。基因敲除技术是揭示基因功能和建立动物模型的最有效的方法。传统基因敲除获得某一突变基因的纯合体动物首先要利用打靶胚胎干细胞（ES）获得嵌合体动物;随后用嵌合体动物与野生型个体交配得到突变基因的杂合体动物;最后才能通过杂合体动物之间的交配来生产纯合体动物。而四倍体补偿技术生产基因敲除动物可以绕过嵌合体而直接获得完全来自ES细胞的杂合体动物,将大大缩短生产基因敲除动物时间。所以,建立利用四倍体补偿法克隆ES小鼠的平台,为以后用此方法制备基因敲除猪等家畜,进而研究突变基因功能及生产各种疾病模型动物具有非常重要的意义。本研究以囊胚内细胞团占总细胞比例和细胞凋亡指数作为鉴定囊胚质量的指标,讨论了小鼠EG细胞团与四倍体胚胎按照1:1、1:2、1:3三种聚合法、微滴与微孔两种培养载体以及EG细胞数对制备聚合胚胎的影响,获得了采用1:2聚合法、微孔培养载体和15个EG细胞来制备的聚合胚胎质量相对较好,建立了四倍体补偿法克隆小鼠的平台。同时,本研究探讨了胎龄和饲养层对分离培养小鼠EG细胞的影响以及不同胎龄原代EG细胞、不同个体EG细胞、不同代数EG细胞中两个印迹基因Igf2和H19差异甲基化区域甲基化水平的异同,得出了通过采集11.5dpc和12.5dpc小鼠生殖嵴分离原始生殖细胞在小鼠成纤维细胞饲养层上分离培养EG细胞比采集13.5dpc小鼠生殖嵴原始生殖细胞在STO饲养层上培养效果好的结论;发现不同胎龄、不同个体及不同代数EG细胞对两个印迹基因Igf2和H19差异甲基化区域（DMR）的甲基化水平没有变化,虽然雄性EG细胞比雌性EG细胞中两个印迹基因Igf2和H19 DMR的甲基化水平高。另外,利用差异染色和TUNEL法检测了四倍体囊胚质量表明,四倍体囊胚无论总细胞数、内细胞团细胞数、滋养层细胞数还是内细胞团细胞数占总细胞数比率都比二倍体囊胚的少,而且四倍体囊胚细胞凋亡指数也比二倍体囊胚的高,说明四倍体在囊胚期质量就很差;利用小鼠抗5-甲基胞嘧啶（5MeC）单克隆抗体检测了利用电融合的方法制备的四倍体胚胎在融合过程中出现了逐步去甲基化的过程,而且四倍体早期胚胎的基因组甲基化模式也与二倍体早期胚胎基因组甲基化模式不同;而且,四倍体囊胚期印迹基因H19发生了沉默,并且两个印迹基因Igf2和H19 DMR的甲基化水平也同体内二倍体囊胚中的不同。这些可能都是影响四倍体胚胎后期不能发育的原因。